DNA마커를 이용해 애기장대의 동형접합자를 분리하는 실험

소개

DNA마커를 이용해 애기장대의 동형접합자를 분리하는 실험이다.
[애기장대 종자를 소독한 후 저온 처리를 하고 애기장대를 발아 시킨다. 애기장대가 성장하는 동안 실험에 사용되는 시약인 멸균증류수, TE, Lysis buffer for cheek cell를 만든다. 성장한 애기장대 잎으로부터 DNA를 추출한다. PCR를 한 후 전기영동과 spectrophotometer을 통해 식물 genomic DNA를 분석하고 DNA마커를 분석한다.]

목차

1. 서론

2. 실험재료 및 방법

본문내용

< 서론 >

이번 실험은 DNA마커를 이용해 애기장대의 동형접합자를 분리하는 실험이다. 먼저 애기장대 종자를 소독한 후 저온 처리를 하고 애기장대를 발아 시킨다. 애기장대가 성장하는 동안 실험에 사용되는 시약인 멸균증류수, TE, Lysis buffer for cheek cell를 만든다. 성장한 애기장대 잎으로부터 DNA를 추출한다. PCR를 한 후 전기영동과 spectrophotometer을 통해 식물 genomic DNA를 분석하고 DNA마커를 분석한다.

- PCR(polymerase chain reaction)

이번 실험에서 PCR을 이용하여 특정 DNA서열을 찾았다. PCR은 DNA 합성의 시작점에 primer를 제공해줌으로써 DNA 중합효소가 특정 DNA 부위를 합성하도록 지시할 수 있다. Primer의 설계가 PCR의 성패를 결정할 만큼 중요하다. Primer 길이는 20~25염기가 바람직하며 primer간의 상보성으로 인해 primer끼리 annealing하지 않도록 한다. 또한 GC함량을 50% 전후로 설계하고 primer 자신의 2차구조를 형성하지 않도록 하며 primer 농도는 최적농도 0.2~1μM의 범위에서 사용한다.
primer는 증폭 될 DNA 부위를 포함하도록 선택하여 새로이 합성된 DNA 사슬이 각 primer로부터 시작하여 상대편 사슬의 primer위치 너머까지 합성되도록 한다. 그러므로 새로운 프라이머가 결합하는 자리가 새로운 합성된 DNA 사슬에 만들어질 수 있도록 한다. 이러한 반응 혼합물을 다시 원래 사슬과 새로이 합성된 사슬이 분리될 수 있도록 가열하여 프라이머 결합, DNA합성, 사슬분리의 사이클이 가능해질 수 있게 한다. PCR의 최종 결과는 n번의 사이클을 거침으로서 primer 사이의 DNA 서열이 복제된 최대 2^n개의 이중사슬 DNA분자를 얻게된다. 즉 특정 부위의 증폭 결과를 얻게 된다.

참고자료

· 없음