[생화학] enzyme purification

목차

I Introduction
II. 실험과정
⊙Tissue homogenization
⊙Salting out
⊙Dialysis
⊙Column preparation
⊙Fractionation
⊙Protain quantification
⊙Activity assay
III.실험결과
IV. Discussion

본문내용

I Introduction
단백질의 정제는 그 구조와 기능의 해명에 필수적인 단계이다. 단백질들은 크기. 용해도, 전하 그리고 결합 친화력과 같은 특성들에 의해 근거해서 서로 분리되거나 그 밖의 분자들로부터 분리될 수 있다. 단백질의 삼차원 구조와 작용기구를 밝히려면 수밀리그램 정도의 상당한 양의 정제된 단백질들이 필요하다. 크기, 용해도, 전하 그리고 특이한 결합 친화성 들과 같은 특성에 기초하여 수천 가지의 단백질들이 활성을 가진 형태로 정제되었다. 정제의 각 단계에서 관심있는 단백질의 독특한 성질을 측정하여 이 기법의 정제효율을 평가한다.
II. 실험과정
⊙Tissue homogenization
①흰쥐의 간, 근육, 심장, 신장, 위의 무게를 잰 후 cold TBS buffer를 가하여 (20% w/v) homogenization
②homogenate를 centrifugation를 모아 volume을 측정한다.
⊙Salting out
① Supernant를 비커에 담아 ice에서 ammonium sulfate를 서서히 가하여 35% saturated solution을 만들어 0°C, 30min incubation 한다.
②centrifugation 4°C, 3000rpm , 40min
③Supernant를 모아 부피를 측정한 후 ice에서 ammonium sulfa

참고자료

· 생화학/lubert stryer/4th/서울외국서적/