[동물자원과학실습 면역학실][서울대] RNA isolation 후 RT-PCR을 이용한 발현확인

소개

[서울대학교]
이번 실험은 THP1 cell line(암세포. monocyte로부터 유래)에 LPS를 처리한 쪽과 LPS를 처리하지 않은 쪽(대조군)의 mRNA 발현 양을 RT PCR을 통해 알아봄으로써 두 group간의 염증성 cykokine(TNF-α)의 발현이 어떻게 되는지 살펴보는 실험이다.

실험 결과 분석과 함께,
RT-PCR과 Real-time PCR, Northern blot, PT-PCR, RPA(RNase protection assay)의 장점과 단점, 사용 시기에 대해서 조사했다.
또한 PCR에 사용되는 시약에 대해서도 조사했다.

기본적인 생명과학 실험에 사용되는 기본원리를 공부하는데 좋은 자료라고 생각한다.

목차

1. 실험 결과에 대한 Discussion
① TNF-α 발현양에 대해
② β-actin 발현양에 대해
2. 조사한 내용
① RT PCR에 대해
② Northern blot, PT-PCR, RPA(RNase protection assay)의 장점과 단점, 사용 시기
- Central Dogma (Gene, mRNA, Protein의 발현)의 측면에서
③ PCR 시약 역할(간단히)
3. 참고문헌

본문내용

세포는 외부의 자극에 따라서 분화하거나 반응한다. 이때 반응과정에서 생성되는 최종 물질은 당연히 단백질이다. 각 세포마다 물질에 대한 반응이 다르며 이는 단백질 발현이 다르다는 것을 의미한다. 그리고 단백질이 다르다는 것은 유전자의 발현(Gene expression)이 다르다는 것을 의미한다. Central Dogma ( DNA → mRNA → Protein)를 봐서도 알 수 있듯이 protein이 다르다는 것은 바로 앞 물질인 mRNA가 다른 것으로 생각할 수 있다. 우리가 세포의 반응에 대해 실험을 할 때는 단백질 발현양을 분석하는 방법도 유용하지만, mRNA를 분석하는 것도 유용하다는 것을 알 수 있다.
mRNA의 정량분석에 사용되는 실험은 크게 3가지로 나눌 수 있다.

1. Northern blot
2. RT-PCR
3. RNase protection assay (RPA)

1) Northern Blot
- 한 개체를 이루는 수많은 세포들은 똑같은 DNA를 가지고 있지만, 모두 똑같은 단백질을 발현하는 것은 아니다. 이러한 사항을 유념해 뒀을 때, 특정 단백질이 특정 조직에서 발현되었는지를 알아보고자 할 때 norther blot을 시행하는 것이다. Central Dogma ( DNA → mRNA → Protein)의 과정에서 보면 어떤 조직 또는 세포에 특정 유전자의 mRNA가 있다는 것을 norther blot을 통해 보이면, 그 조직이나 세포에서는 그 특정 유전자가 단백질로 발현되고 있다고 말할 수 있다는 것이다.

참고자료

· ① BRIC 실험 (http://www.bric.postech.ac.kr/labinfo)
· ② 솔젠트 학술 자료 나눔 카페 (http://cafe.naver.com/solgent.cafe)
· ③ 연세대학교 분자생물학 (http://biochemistry.yonsei.ac.kr/)