DNA ligation

소개

Insert와 Vector를 준비하고 Ligation 함으로써 재조합DNA를 만들어 낸다

목차

1. Abstract
2. Introduction
3. Methods & Materials
4. Result
5. Discussion

본문내용

5. Discussion

이번 실험은 DNA ligation 과정에서 넣어주어야 할 Insert와 Vector의 양을 계산하여 우리가 가지고 있는 Sample의 농도를 고려한 각각의 첨가량을 계산하는 방법이 주된 실험 내용이었다. 이번 실험에서 비록 Ligation된 결과를 직접 확인하진 못했지만, 우리가 만든 Sample이 또 다음 실험에 사용될 것이므로 이번 실험의 결과를 확인할 수 있을 것이다.
Result-2 를 보면 Vector의 전기영동 사진 중 Uncut 과 Cut 의 밴드형성 차이를 볼 수 있는데 이 부분에서 후자는 단일 밴드를 형성함으로서 Linear 형태를 형성했음을 확인할 수 있다. 우리가 Vector와 Insert의 양을 계산할 때 Vector의 크기는 결과값에 지대한 영향을 미치므로, 계산시 반드시 단일밴드를 형성한 Cut Vector의 밴드를 Marker와 비교하여야 하겠다.
Ligation 과정에서 Vector를 많이 넣어준다고, 혹은 Insert를 많이 넣어준다고 무조건 반응이 잘 일어나는 것은 아니다. 일반적으로 Vector와 Insert의 몰 비율은 각각의 크기에 의해 결정되는데, 보통은 Size를 맞춘다. 예를 들어 Vector가 5kb 이고 Insert가 1kb라면 몰비율을 1 : 5 로 맞추어 실험을 진행하면 전기영동 결과 Band에서도 비슷한 intensity를 나타내어 실험이 수월하다고 한다. 하지만 이번 실험에서는 보통의 실험에서 가장 많이 사용되는 1 : 3 의 비율로 진행했다. 기회가 된다면 몰 비율을 달리하여 결과를 비교해보고 싶다.

참고자료

· 유전공학개론 / Takeshi Uozumi / 김재호 장혜영 / 2003.07.10 / 청문각
· 유전공학의 이해 / 권혁빈 남상욱 / 2008.07.20 / 라이프사이언스
· http://bric.postech.ac.kr -> 실험 -> 실험 Q&A (질의 응답 참고.)