생화학실험_preparation of competent e-coli & transformation

소개

생화학실험_preparation of competent e-coli & transformation

목차

1. Subject :
2. Object :
3. Theory
4. Materials & Apparatus
5. Method
6. References

본문내용

2. Object : DNA가 유전적 형질전환을 한다는 것을 알아보기 위해서 competent E-coli를 준비하고 Transformation에 대하여 이해한다.
3. Theory
1) Competent Cell
(1) Ligation을 마친 DNA나 circular 형태의 Plasmid를 증폭하기 위해서 혹은 expression하기 위해서 E-coli를 transformation 해야 한다. 이때 사용하는 E-coli host cell을 competent cell이라 부른다. 다시 말해, E-coli가 외부의 DNA를 받아들일 수 있는 상태로 만들어 준 세포를 competent cell 이라고 한다.
(2) Ligation을 마친 DNA나 circular 형태의 Plasmid를 E-coli에 넣기 위해서는 우선 Calcium Chloride, Manganase Chloride, Dimethyl Sulfoxide (DMSO), Hexamminecobalt Chloride 등의 시약으로 화학처리를 하여 재조합된 Plasmid가 세포막을 통과해 들어갈 수 있도록 해야 한다.
(3) Competent Cell의 제조 방법
▷ Fresh 또는 frozen 방법
이 방법은 Hanahan(1983)에 의해 개발된 방법으로 DH1, DH5, MM294 등의 strain strain : 균주(菌株), 계통(본래의 세균과 성질이 약간 다른 균)
을 높은 효율(5 ×108 transformed colonies/μg of supercoiled DNA)로 형질전환 시킬 수 있으며, strain에 따라서 효율이 떨어지기도 하지만 (다른 strain에서는 약 5~10배 정도 효율이 떨어지고 MC1061 등은 이 방법에서 형질전환 되지 않는다.) 사실상 거의 모든 경우에 사용할 수 있는 방법이다. 분주하여 -70°C deep freezer에서 2~3개월간 보관하여도 효율이 별로 감소하지 않는다.
▷ Calcium chloride를 이용한 방법
CaCl2로 처리하여 competent cell로 만들면 plasmid가 cell에 들어갈 수 있게 된다. 이때, Heat shock을 가하면 plasmid가 cell 안으로 들어가는 효율(대략 107 transformed colonies/μg of supercoiled DNA)을 증가시킬 수 있다. E-coli가 DNA를 흡수할 수 있는

참고자료

· ․ 로드니 보이어 저(조성호 역), 생화학의 이해, 2004, 월드사이언스, p.344~346
· ․ 진익렬, 게놈미생물학, 2005, 월드사이언스, p.173~179
· ․ Daniel L. Harrl, Elizabeth W. Jones, 필수유전학, 2004, 월드사이언스, p.234~418
· ․ D. Peter Snustad, Michael J. Simmons, 최신유전학, 2002, 범한서적, p.512~513
· ․ T.A. Brown, 유전자 클로닝 입문, 1998, 월드사이언스, p. 63~115
· ․ Takeshi Uozumi, 유전공학개론, 1999, 청문각, p. 47~58
· ․ http://biochemistry.yonsei.ac.kr/biochem_molecular/gene_cloning_17.php
· ․ http://biochemistry.yonsei.ac.kr/biochem_workshop/bacterial_transformation.php