쥐의 장기별 단백질 분리 및 Western blot 분석을 이용한 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase의 발현 분석

소개

영남대학교 의대 분자의학 실습과제.
쥐의 장기별 단백질 분리 및 Western blot 분석을 이용한 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase의 발현 분석

목차

Ⅰ. Introduction
Ⅱ. Materials and Methods
1. 시료 및 기구
2. 단백질 정량(BCA법)
3. SDS polyacrylamide gel 만들기
4. SDS-PAGE
5. Gel staining
6. Electrotransfer
7. Blocking 및 항원-항체 반응 유도

Ⅲ. Results and Discussion
1. 단백질 정량
2. Western boltt 결과
3. 기타

Ⅳ. Reference

본문내용

Ⅰ. Introduction

GAPDH(Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase)는 해당과정에서 glyceraldehyde-3-
phosphate를 1,3-bisphosphoglycerate로 변환시켜 주는 효소이다.



해당과정에서 NAD+가 NADH로 변환되는 유일한 단계이며, GAPDH는 대표적인 housekeeping gene이다. 이 실험은 쥐의 뇌, 근육, 간 등의 장기에서 단백질을 추출하고 정량한 후, 전기 영동하여 각 단백질들을 분리하고, Western blot으로 GAPDH의 발현정도를 분석하는 것이다. 이 실험을 통해 Western blott의 원리와 발현 분석 방법 등을 공부해 본다.


Ⅱ. Materials and Methods


1. 시료 및 기구

1) Day1: BSA (1mg/ml), microcentrifuge tube, centrifuge, pipette, Heat block, poyglove, Ice box, TBS 용액, 50ml conical tube, centrifuge, pipette, 96 well plate, BCA solution A&B 등을 준비한다.
2) Day2: TTBS, blocking buffer, gel cast, primary antibody, 3MM paper, transfer buffer, electrophoresis buffer, transfer casette, nitrocellulose, , ice pack, ponceau S.를 준비한다.
3) Day3: ECL solution, LAS3000, HRP-conjugated secondary antibody(5% nonfat dried milk in TTBS)를 준비한다.

참고자료

· 1. 2006, 실험생화학, Korean society of medical biology and molecular biology, 5th edition
· 2. 생화학 실습서