[분자생물학]Cloning Vectors for Organisms Other than E. coli

소개

gene cloning 실험을 위해 대장균(e.coli) 대신 다른 숙주를 이용하여 여러 실험적인 이론을 알아보는 분자생물학적인 레포트입니다.

목차

Cloning Vectors for Organisms Other than E. coli
1. Vectors for Yeast and Other Fungi
(1) Selectable markers for the 2㎛ plasmid
(2) Vectors based on the 2㎛ circle -yeast episomal plasmids
(3) A YEp may insert into yeast chromosomal DNA
(4) Other types of yeast cloning vector
(5) Artificial chromosomes can be used to clone huge pieces of DNA in yeast
(6) Vectors for other yeasts and fungi
2. Cloning Vectors for Higher Plants
(1) Agrobacterium tumefaciens - nature`s smallest genetic engineer
(2) Cloning gene in plants by direct gene transfer
(3) Attempts to use plant viruses as cloning vectors
(4) Problems with cloning genes in monocotyledonous plants
3. Cloning Vectors for Animal Cells
(1) Cloning vectors for insects
(2) Vectors based on animal viruses
4. 참고 문헌

본문내용

대부분의 cloning 실험은 숙주로서 E. coli 와 함께 수행되며, 매우 다양한 cloning vector 들이 이 생물체에 대해 유용하다. Cloning 실험의 목적이 유전자 구조와 기능 같은 분자생물학적인 기본적 특징을 연구할 때 특히 그렇다. 그러나 어떤 경우에는 gene cloning 실험을 위해 다른 숙주를 이용하는 것이 바람직할 수도 있다. 이것은 그 목적이 유전자 연구가 아니라 중요한 대사산물(ex, hormone)의 합성을 조절하거나 향상시키고, 또는 생물체의 특징을 변화시키는(ex, 제초제 저항성 농작물에 도입시키는 등) cloning 기법을 사용하는 생물공학분야에서 특히 그렇다. 따라서 E. coli 이외의 다른 생물체를 위한 cloning vector를 생각해야 한다.

1. Vectors for Yeast and Other Fungi
Yeast Saccharomyces cerevisiae는 생물공학에서 가장 중요한 생물체 중 하나이다. Yeast는 양조와 제빵에서 중요한 역할을 할 뿐만 아니라, 조작된 유전자로부터 중요한 의약품을 생산하기 위한 숙주생물체로서 이용되고 있다. Yeast를 위한 cloning vector 들의 개발은 S. cerevisiae의 대부분 균주에 존재하는 plasmid인 2㎛ circle의 발견에 의해 자극되었다.
(1) Selectable markers for the 2㎛ plasmid
2㎛ circle은 크기가 6kb이고 yeast cell내에서 copy number는 70~200 사이이다. 복제는 plasmid origin을 이용하고, 복제를 위해 필요한 효소는 plasmid의 REP1, REP2 에 암호화되어 있는 단백질, 그리고 일부는 숙주세포로부터 공급받는다. 따라서 2㎛ circle은 cloning vector로서 이상적이다.
Figure 1 The yeast 2 flm plasmid. REP 1 and REP2 are involved in replication of the plasmid, and FLP codes for a protein that can convert the A form of the plasmid (shown here) to the B form, in which tile gene order has been rearranged by intramolecular recombination. The function of D is not exactly known.

참고자료

· Gene Cloning & DNA Analysis An Introduction 5th Ed. by T A Brown by alive p.132~156『Chapter 7』
· 유전자 클로닝과 DNA 분석 입문서 번역