vector

소개

제한효소 (restriction enzyme)를 이용하여 vector를 절단한 후, agarose gel 상에서 전기영동하여 얻은 결과로 restriction mapping을 하는 실험보고서

목차

Abstract
Introduction
Materials & Methods
Results
Discussion
References

본문내용

Abstract

이번 실험은 제한효소 (restriction enzyme)를 이용하여 vector를 절단한 후, agarose gel 상에서 전기영동하여 얻은 결과로 restriction mapping을 하는 것이다. Vector는 pBluescript Ⅱ를 사용하였으며 restriction enzyme은 BamHⅠ과 XbaⅠ을 사용하였다. 실험결과, 3.0kb 정도 크기의 밴드가 나왔으며 이는 restriction enzyme이 제대로 작용하여, vector를 작은 한 조각과 큰 한 조각으로 절단된 것이다.

Introduction

Vector
Vector는 외부의 DNA를 세포로 넣어주는 전달체 역할을 하는 것으로 다음의 특징들을 가지고 있다. 첫 번째로 vector는 세포 내에서 자가복제(self-replication)를 할 수 있다. 박테리아 세포 내에는 박테리아가 고유하게 가지고 있는 chromosomal DNA가 있는데, 이것은 세포 하나당 하나밖에 있을 수 없는 것이다. 하지만 vector는 한 세포 내에서도 스스로 복제하여 수많은 copy가 존재할 수 있다. 두 번째로 vector는 항생제를 이용한 선택(selection)이 가능하다. Vector에 존재하는 항생제 내성 유전자를 이용하면 DNA가 세포 내로 주입되었는지 아닌지를 판별할 수 있는 것이다. 세 번째로 Multiple cloning site(MCS)를 가지고 있다. vector는 일정부위에 제한효소 절단부위가 밀집된 부분이 있어서 cloning에 용이하다. 마지막으로 Vector 부위를 이용한 DNA sequencing, 단백질 발현 등을 할 수 있다. 원하는 유전자를 삽입하고 나면 Vector에 존재하는 염기서열을 이용하여 DNA sequencing을 하기 편하고, vector에 달린 여러 부분을 이용하여 단백질 발현을 할 수도 있다. Vector의 종류에는 plasmid, bacteriophage, cosmid, phagemid 등 여러 가지가 있으며, 이중에서 가장 많이 쓰이는 것은 plasmid 이다.

참고자료

· 1. Lansing M. Prescott, John P. Harley and Donald A. Klein, Microbiology, 6th edition, Mcgraw Hill, pp322~327
· 2. 연세대학교 의과대학 생화학-분자생물학교실 http://biochemistry.yonsei.ac.kr/
· 3. New England Bio Labs Inc. http://www.neb.com/nebecomm/tech_reference/restriction_enzymes/double_digests.asp