생명공학

소개

생명공학 기법에 관한 내용

목차

SSH (Suppression subtractive hybridzation)
1. Abstract
2. Materials and methods
3. Discussion
4. Reference

RT-PCR
1. Abstract
2. Methods
3. Result and Discussion
4. Reference

GenomeWalker
1. Abstract
2. Materials & Methods
3. Result
4. Discussion
5. Reference

RACE
1. Abstract
2. Methods
3. Result
4. Discussion
5. Reference

본문내용

1. Abstract
SSH는 Suppression subtractive hybridzation의 줄임말로써 subtracted cDNA library 방법을 발전시킨 것으로 target sample과 driver sample 사이의 공통적인 sequence가 있을 경우 hybridization이 될 때 공통 염기서열을 가진 sample들이 배제되는 방법을 과정이 더해진 것이다. 이러한 방법을 통해서 우리가 원하는 cDNA를 1000배에서 5000배 정도로 증폭됨을 알 수 있다.
고등 진핵생물에서 생물적인 발현은 통상적으로 다른 gene들의 표현에 의해서 달라질 수 있다. 이러한 과정들은 통상적으로 분자 수준에서의 regulation으로 이루어지는 것이 대부분이며 이러한 것을 규명하기 위한 노력이 이루어져 있다. 이러한 SSH 과정 역시 마찬가지이다. SSH는 우리가 원하는 gene의 표현형을 알기 위한 과정이다. SSH 이전에는 cDNA subtraction를 통해 이러한 expression gene을 알아볼 수 있었으나 이러한 실험을 위해서는 20㎍이상의 poly A(+) RNA가 필요했으며 또한 subtraction과정이 계속적으로 반복되어 실험자로서는 많은 시간과 노력이 필요되었다. 하지만 PCR을 기초로한 cDNA substraction인 SSH의 경우에서는 선별적인 증폭과정을 통해 원하는 cDNA만을 얻을수 있으며 원하지 않은 cDNA는 증폭이 suppression되는 방법을 응용하는 방식이다. 그리고 SSH는 mRNA의 양의 차이가 문제가 되지 않으며 또한 ssDNA와 dsDNA의 분리도 할 필요가 없는 매우 효율적인 방법이다.

참고자료

· 1) SMART RACE cDNA Amplification Kit. Clontech
· 2) 5` RACE System for Rapid Amplification of cDNA Ends v. 2.0, Life Technologies