HeLa Cell Cycle

소개

이전 실험에서 subculture한 HeLa Cell의 cell cycle을 Fluorescence Activated Cell Sorter (FACS)를 통한 DNA content를 구해 간접적으로 알아봄으로써 cell cycle analysis의 원리를 제대로 이해하고 향후 실험에 적용할 수 있도록 한다.

목차

Purpose
Introduction
Material
Method
Result
Discussion
Reference

본문내용

Purpose
이전 실험에서 subculture한 HeLa Cell의 cell cycle을 Fluorescence Activated Cell Sorter (FACS)를 통한 DNA content를 구해 간접적으로 알아봄으로써 cell cycle analysis의 원리를 제대로 이해하고 향후 실험에 적용할 수 있도록 한다.

Introduction
정상적인 세포는 성장하고 열하는 과정을 거치는데 이를 cell cycle이라고 하며, 크게 G1, S, G2, 그리고 M phase로 나뉜다. G1 phase에서는 biosynthetic process가 활발하게 일어나는 등 S phase로 전환하기 위한 준비가 이루어지고, checkpoint가 존재하여 S기로의 전환이 제어된다. S phase 내에도 checkpoint가 있고 여기에서는 ploidy는 유지되는 상태에서 DNA synthesis가 일어난다. G2 phase에서는 mitosis에 필요한 단백질들이 합성되고, checkpoint를 거쳐 M phase로 이어진다. M phase에서 잘 알려진 mitotic cell division이 활발히 일어나고 metaphase에 checkpoint가 존재한다. 한편 G0 phase는 cell이 cycle로부터 분리되어 cell division이 중단된 상태로써 적절한 자극에 의해 cell cycle을 재개한다.
Cell cycle analysis에 자주 쓰이는 방법으로는 FACS가 있는데, 이는 flow cytometry의 한 방법으로 fluid를 통해 움직이는 입자에 빛을 쏴주었을 때 light scattering 결과를 분석하여 입자에 대한 다양한 물리적 정보를 얻어내는 방법이다. Heterogenous solution으로부터 특정 cell을 분리하는데 유용하며, 각각의 cell에 대해 빠르고 정량적인 결과를 얻을 수 있어 이번 연구에 적절하다.

Material
PBS.
2 mM thymidine. 과량의 thymidine은 thymidine kinase에 의해 TTP로 전환되고, 연쇄작용으로 인해 최종적으로 ribonucleotide reductase를 억제시킨다.

참고자료

· Jennie P. Mather, David Barnes. Animal Cell Culture Methods (1998)
· Joe W. Gray. Techniques in cell cycle analysis (1987) Zbigniew Darzynkiewicz
· Chrystel Comayras, Christian Tasca, Sylvie Yvonne Peres, Bernard Ducommun, Eric Oswald, and Jean De Rycke. Escherichia coli Cytolethal Distending Toxin Blocks the HeLa Cell Cycle at the G2/M Transition by Preventing cdc2 Protein Kinase Dephosphorylation and Activation (1997) Infection and Immunity
· EDWARD F. SROUR, Ph.D. Flow Cytometry (2010) Indiana University School of Medicine
· James Marvin. Flow Cytometry Basic Training (2010) Northwestern University
· Sergio J. Ochatt. Flow Cytometry (2006) Medicago truncatula handbook
· Dominique Illinger, Lilance Italiano, Jean-Paul Beck, Caroline Waltzinger, Jean-Georges Kuhry. Comparative Evolution of Endocytosis Levels and of the Cell Surface Area during the L929 Cell Cycle: A Fluorescence Study with TMA-DPH (1993) Biol
· Eui-Cheol Shin. FACS and Cell Sorting (2010) KAIST
· Nich Thomas, Ian D.Goodyer. Shealth Sensors: Real-time Monitoring of the Cell Cycle (2003) TARGETS