PCR 결과레포트 [A+]

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"PCR 결과레포트"에 대한 내용입니다.

목차

1. Abstract
2. Experiment
3. Result
4. Discussion
5. Reference

본문내용

1. Abstract
PCR(Polymerase Chain Reaction)은 중합효소 연쇄반응이라고 하며, DNA 이중나선을 분리시킨 단일 가닥의 원하는 부분을 주형으로, 새로운 DNA 가닥을 복제시키는 기술이다. 첫 번째 실험, miniprep에서 얻은 plasid DNA를 PCR 실험한다. PCR은 크게 세 가지 과정(Denaturation, Annealing, Extension(Elongation))으로 나뉜다. Denaturation은 DNA가 변성되는 과정으로, DNA 이중가닥의 수소 결합이 파괴되어 단일 가닥으로 나뉜다. Annealing은 분리된 DNA 단일 가닥에 각각 primer를 결합시키는 단계이다. 마지막으로 Extension은 DNA polymerase에 의해 DNA가 5’에서 3’ 방향으로 합성된다. PCR machine을 통해 각 단계에 적절한 온도와 시간을 설정하여 실험한다. 이후 얻은 DNA를 아가로스 겔 전기영동하고, UV transilluminator를 통해 결과를 확인한다.

2. Experiment
(1) 기구 및 시약

PCR machine

Micropipette

PCR tube
Electrophoresis apparatus
Electrophoresis agarose
UV transilluminator

<중 략>

4. Discussion
앞서 1번 실험인 miniprep에서 추출한 plasmid DNA 2에 Nuclease free water 12.5, Forward primer (T7 primer) 10, Reverse primer (T7 terminator primer) 0.5, pfu master mix(pfu DNA Polymerase, dNTPs, MgSO4, Reaction Buffer) 25를 차례로 PCR tube에 넣어 PCR mixture를 만든다.
제조된 PCR mixture를 PCR machine을 통해 DNA 증폭시킨다. 먼저, supercoiled 상태로 보관되어 있었던 plasmid DNA를 풀어주기 위하여 94℃에서 3min 가량 가열하는 단계를 Initial Denaturation이라고 한다.

참고 자료

남상욱, 권혁빈 외 1인 , 2016, 라이프사이언스, 유전공학의 이해 3th
pfu DNA polymerase master mix protocol
00_pET-22b(+)
바이오파마 2020 비전과 로드맵 수립/보건산업진흥원(2014)