[생물학 및 실험] 형질전환

소개

형질 전환에 관한 보고서 입니다.

목차

1. 실험의 목적 및 이론적 배경

2. 실험재료 및 기구

3. 실험방법

4. 실험결과

5. 고찰

6. 참고문헌

본문내용

1. 실험의 목적 및 이론적 배경
(1) 실험목적
1. 세균의 유전 형질전환 원리와 과정을 이해한다.
2. Plasmid DNA를 이용하여 E.coli의 형질전환 및 E.coli의 수용세포 준비에 필요한 절차를 이해한다.

(2) 이론적배경
- 형질전환(transformation)
형질전환(transformation)이란 세포의 파괴 등에 의해 노출되어 외부로 방출된 DNA가 다른 세포로 끼어 들어가는 과정을 말한다. 이 과정에서 세포간의 직접적인 접촉이나 다른 매개체의 도움이 관여하지 않는다. 형질전환이란 용어는 그리피스가 세균의 일종인 폐렴쌍구균에서 쥐에게 독성을 나타내는 형질이 죽은 세균으로 부터 살아있는 세균으로 전달되는 과정을 발견하고 명명되었고, 이때 전달되는 물질은 물론 DNA 이다.
 
자연계에서 이러한 현상이 일어날 확률은 낮은 편이다. 세포가 죽은 후 내부에 있던 DNA가 외부로 방출되는 것은 자연스러운 현상이나 이들의 대부분은 분해되어 영양물질로 재사용되며, DNA의 기본구조를 유지한 채로 다른 세포로 들어갈 기회는 거의 없기 때문이다. 또 이와 같은 형태의 DNA가 존재한다 할지라도 이를 내부로 수용할 수 있는 능력을 갖는 세균(competent cell)은 제한되어 있기 때문이다.

3. 실험방법
1. 10ul의 IPTG가 들어있는 E. tube에 X-gal 40ul를 넣고 잘 섞은 후 LB plate(contained 100ug/ml Ampicillin)에 넣고 유리상각봉(화염멸균하고 잘 식힌다.)으로 골고루 도말한다.
2. 37℃로 조절된 배양기에 넣어둔다.
3. -70℃에 100ul씩 보관된 competent cell(E.coli, DH5α) tube를 꺼내어 손바닥에 쥐고 있으면 cell용액이 녹기 시작한다. 2/3정도 녹으면 곧바로 얼음에 넣어둔다.
4. 아래 표와 같이 조별로 Plasmid DNA양을 다르게 넣은 후 1초간 Vortexing한다.

참고자료

· 1. 분자생물학, 한국분자생물학회, 아카데미서적, 1997
· 2. 분자생물학노트, 이대섭, 유전공학실험서 (3판), 생명공학연구소, 1998
· 3. http://www.kordic.re.kr/%7Etrend/Content302/biology19.html
· 4. http://biochemistry.yonsei.ac.kr/biochem_molecular/