투과전자현미경(TEM) 주사전자현미경(SEM) 시편제작

소개

투과전자현미경과 주사전자현미경이 시편제작 과정을 상세히 요약했습니다.

목차

[투과 전자현미경(TEM) 시편 제작]
1) 투과 전자현미경 시편 제작의 일반적인 개요
2)시료채취(Sampling) 와 고정(Fixation)
(1) 조직 채취 (Sampling)
(2) 고정 (Fixation)
① 고정 방법(fixation)
② 탈수 (Dehydration)
(3) 포매 (Embedding)
① 포매제의 종류
② 포매제의 구성 (Epoxy resin 을 기준으로 함)
③ 포매제의 혼합 (Epon mixture)
(4) 초박절편 (Sectioning of Specimen for TEM)
* KMR2 Knife maker 사용법
* 유리칼의 검사
* Trough 제작
② Diamond Knife
③ 초박절편
3) 염색(Staining)
4) 전자염색 (Grid Staining)
a) uranyl acetate 염색법
b) Lead citrate 염색법 (Reynold`s method)

[SEM (주사현미경)의 시료제작]
1) 시료채취(Sampling)
2) 고정(Fixation)
① 고정 방법(fixation)
② 탈수 (Dehydration)
3) 임계건조
4) Mounting
5) 금이온 증착(Coating)

참고문헌

본문내용

[투과 전자현미경(TEM) 시편 제작]
1) 투과 전자현미경 시편 제작의 일반적인 개요
(1) 원리
시료채취와 고정은 전자현미경 기법의 가장 중요한 시작이다. 전자현미경 관찰을 위한 좋은 고정은 아무리 강조해도 지나치지 않다.

(2) 목적
고정의 목적은 고정후의 일련의 과정(조직처리과정) 동안 일어날 수 있는 구조의 미세한 변화를 방지하기 위함이다.

(3) 조직의 크기
고정할 조직절편의 크기는 일반적으로 1mm3을 초과하지 않아야 한다. 그 이유는 glutaealdehyde가 1mm이상 침투하지 못하기 때문이다. 만약 조직이 1mm3를 초과할 경우 실제 관찰 부위의 세포 미세구조가 변형 또는 자가융해 등의 변화가 일어 날 수 있다.

(4) 조직절편의 수와 모양
고정할 조직절편의 수는 10개이하로 하는 것이 좋다. 조직절편의 모양은 정육면체가 좋으며, 조직이 손상되지 않도록 razor blade로 세절한다.

(5) 고정제의 pH
고정제의 pH는 세포막의 효소활서에 영향을 미치므로 조직의 pH와 가까울수록 좋다. 동물시료는 pH가 7.4에 가까우므로 고정제의 pH는 7.2~7.4정도가 알맞다. 그러나, pH의 결정은 완충제의 선택에 따라 다를 수 있다.

(6) 삼투압
투과전자현미경시료를 위한 고정제의 삼투압 조정은 Sucrose, sodium chloride를 사용한다.

(7) 온도
온도는 고정제의 중요한 요소로서 고정제의 침투속도와 깊은 관련이 있다. 낮은 온도의 고정제가 사용되는데 이것은 세포내 물질의 추출을 줄일 수 있으며 자가융해를 방지할 수 있다.

(8) 고정시간
대부분 고정시간은 1시간에서 4시간이다.

2)시료채취(Sampling) 와 고정(Fixation)
(1) 조직 채취 (Sampling)
1) 고정할 조직절편의 크기는 일반적으로 1mm3을 초과하지 않아야 한다.
2) 방향성이 요구되는 경우에는 1x1x2mm 정도로 한쪽 방향을 약간 길게 하여야 후에 embedding 과정에서 포매 하기가 용이하여진다. (skin, nerve등)
3) 조직을 채취하는데 시간이 오래 걸리거나, 고정이 잘 안 되는 조직은 perfusion 한 후 채취한다.

참고자료

· 전자현미경 시편 제작 / 이정용 / 大英社
· 전자현미경 매뉴얼 / 김대중 / 고려의학
· http://super.gsnu.ac.kr/lecture/microscopy/em.html
· 구글 이미지 검색
· KMR2 Knife maker 사용법 매뉴얼