단백질 발현 위치 분석 - 세포내 및 분비 발현 Western blot

소개

단백질 발현 위치 분석을 Western blot을 시행하여 확인한 결과 레포트 입니다

목차

1. Subject
2. Object:
3. Introduction
4. Material & Method
6. Discussion
7. Reference

본문내용

3. Introduction
◆Hansenular polymorpah(Pichia angusta)
① thermotolerant methylotrophic yeast
-열을 잘 견디고 methanol 존재 하에서 잘 자라는 yeast.
② Species of strain - Strain CBS4732, Strain DL-1, Strain NCYC495
③ Properties of strain
1) Strains CBS4732 and NCYC495 can be mated whereas strain DL-1 cannot be mated with the other two (Haploid).
2) H. polymorpha is a thermo-tolerant microorganism with some strains growing at temperatures of 50 °C and more. (Optimal growth temperature is 37℃)
3) Cells grown under conditions of elevated temperature accumulate a sugar named trehalose.

◆ SDS-PAGE
-protein의 size별 detection을 위해 사용.
-SDS의 기능: protein의 비공유 결합을 절단하는 역할.
SDS의 음이온들이 주된 peptide chain에 결합.
-β-mercaptoethanol의 기능: S-S 결합을 절단하여 남아있는 protein의 3차 구조와 4차 구조를 깨주는 역할.
-polyacrylamide gel에 전기영동하고, dye를 통해 running이 끝난 것을 판단할 수 있음.

◆ Protein preparation
① TNE(Tris-HCl, NaCl, EDTA) lysis buffer.
-Lysis buffer of yeast cells.
-EDTA는 효소의 cofactor로 작용하는 divalent cation(2가 양이온)을 잡아 둠으로써 효소 활성을 억제.
② PMSF(phenylmethanesulphonylfluoride)
-PMSF는 serine protease 억제.

참고자료

· 단백질 실험노트(上), 김승호, 2006년, 월드사이언스, p. 123-125
· http://www.bmskorea.co.kr/bms_Product/bms_Product_Common/bms_Product_Common_List.aspx?sec=maker&cstep=5&cgroup=2064
· http://www.myungsung.net/popup/molecular03-5-2.htm
· http://en.wikipedia.org/wiki/Glucose_oxidase