Monoclonal antibody 만드는 과정(방법)

소개

Monoclonal antibody 만드는 과정(방법)을 여러 책자와 자료를 토대로 정리해놓았습니다.

목차

< Simple scheme ; 각 단계의 자세한 내용은 다음 장부터 있습니다.>
1. Antigen 준비 ; Antigen의 형태 및 사용량
1) Soluble Proteins
2) Particulate Proteins
3) Proteins produced by overexpression
4) Synthetic peptides
5) Live Cells
6) Nucleic Acids
7) Carbohydrates
2. Immunization of mice
3. Preparation of myeloma cells
4. Preparation of mouse feeder cell
5. Fusion
6. Cloning of hybridoma cell lines by limited dilution
7. Freezing and recovery of hybridoma cell lines
8. Production of ascites fluids
<참고문헌>

본문내용

1. 항원 준비
항원은 protein 혹은 peptide를 이용한다. 정제된 단백질을 이용하며, peptide의 경우, DB에서 알아낸 sequence를 이용하여 항원성이 있는 부분을 예측한 뒤 12～15mer 정도의 peptide를 합성하여 이를 conjugation을 통해 항원으로 작용하게 한다.

2. Immunization
준비된 항원을 adjuvant와 잘 섞어서 항체를 얻을 개체에 injection하며 primary injection이후 약 3주 간격으로 동일 항원을 2～3회 injection 하여 항체 생성

3. 과다한 항원의 유입으로 비대해진 spleen을 꺼내어 myeloma cell과 세포 융합.

4. HAT 배지를 이용하여 융합된 세포(hybridoma cell)을 선택한다. 이때 HAT 배지는
선택배지로 hybridoma cell만 살게 하는 작용을 한다.

5. 선택된 hybridoma cell 중에 원하는 항원에 반응하여 항체를 분비하는 것만 다시
선택. 이를 subcloning이라 한다.
1) subcloning의 방법으로는 westernblotting과 immunoprecipitation 등의 방법이 쓰인다.
이런 작업을 screening 이라 한다.

6. 세포 융합 및 screening으로 만들어진 monoclone을 배양하면 monoclonal antibody를
얻을 수 있다. 하지만 이에는 많은 비용과 오랜 시간이 소요되므로 대개 동물을
이용하여 대량의 monoclonal antibody를 제작한다.

참고자료

· 1. “Monoclonal Antibody Production
· - NATIONAL ACADEMY PRESS Washington, DC 1999
· - http://grants.nih.gov/grants/policy/antibodies.pdf
· 2. Antibodies, A LABORATORY MANUAL
· - Ed Harlow, David Lane 지음 / Cold Spring Harbor Laboratory 출판(1988)
· - 경상대학교 중앙도서관 5층 자연과학(신간)
· 3. MONOCLONAL ANTIBODIES: A MANUAL of TECHNIQUES
· - Heddy Zola 지음 / CRC PRESS 출판(1987)
· - 경상대학교 중앙도서관 5층 자연과학(신간)
· 4. Bio Medical Research (유욱준 지음)