Total RNA isolation & Reverse Transcription for the cDNA synthesis from RNA

소개

이번 실험에서는 E.coli(DH5α)로부터 분리해낸 Total RNA를 이용하여 RT-PCR을 통해 cDNA를 제조해보고 이 과정에 대해 이해하고 central dogma의 원리를 이해한다.

목차

Abstract:
Introduction:
Materials & Methods:
Result:
Discussion:
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본문내용

이번 실험에서는 E.coli(DH5α)로부터 분리해낸 Total RNA를 이용하여 RT-PCR을 통해 cDNA를 제조해보고 이 과정에 대해 이해하고 central dogma의 원리를 이해한다. RNA를 분리하기 위해서는 RNA의 손상을 막기 위해 RNase를 최소화하고, RNA를 분리하기 위해 많이 쓰이는 TRIZOL을 이용한다. RNA를 분리하기 위해서는 Homogenization, Phase separation, RNA precipitation, RNA wash, Re-dissolving and measuting의 순서로 각 단계마다 TRIZOL, CHloroform, Isopropanol, Etanol, DEPC-treated water을 처리해 주어야한다. 이 과정을 모두 지나면 분리된 RNA를 얻을 수 있고, spectrophotometer으로 및 을 측정하여 RNA의 purity와 양을 측정한다. 이렇게 얻어진 RNA는 reverse transcriptase를 이용하는 RT-PCR을 거쳐 complementary DNA를 합성하는데 사용된다. 합성되는 cDNA는 E.coli(DH5α)로부터 분리한 total RNA에 상응한다. 이러한 실험을 통하여 각각의 실험과정을 이해하고, 더 나아가 이 실험을 통하여 유전자의 발현기작을 분석 및 이해한다.
Introduction:
세포내의 ribonucleic acid의 3가지 주요한 형태는 messenger RNA(mRNA), ribosomal RNA(rRNA), transfer RNA(tRNA)이다. 이들 3가지 NA은 모두 한 줄기로 된 polynucleotide이지만, 특정한 범위의 분자량과 침강계수를 가지고 있다. 박테리아 세포에서 대부분의 RNA는 원형질에 존재하며, 일부가 transcription 과정에서 합성되면서 DNA에 비공유결합을 이루고 있을 뿐이다.
mRNA는 4가지 주요한 염기로만 구성되어 있다. 이것은 핵에서 transcription 과정을 통해 생성되는데, 염색체 DNA의 한 strand의 염기 배열순서가 효소에 의해 한 strand의 mRNA로 전사된다. 합성된 mRNA의

참고자료

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· - http://en.wikipedia.org/wiki/Guanidinium_thiocyanate-phenol-chloroform_extraction