Preparation of Polyclonal Antibodies and Western Analysis

소개

이번 실험에서는 E.coli에서 과발현 시켜 정제한 His tagged green fluorescence protein을 항원으로 사용하여 mouse에 세 번 intraperitoneal injection하여 polyclonal antibody인 anti GFP antibody를 얻어낸다. intraperitoneal injection를 할 때마다 Freund`s adjuvant을 섞어서 주사하여 항체생산이 잘 되도록 유도한다. 얻어낸 antibody는 SDS-PAGE로 분리하고, 전기영동 시킨 polyacrylamide gel로부터 무수한 구멍이 있는 nitrocellulose membrane으로 단백질을 이동시켜 단백질의 구조가 재생되면서 본래의 항원 결정기를 갖게 된다. Anti-Mouse IgG-Alkaline Phosphatase와 BCIP/NBT의 보라색 발색반응을 통하여 Colorimetric detection을 한다. 이와 같은 Western blotting을 통하여 목적 단백질을 확인하도록 한다.

목차

Abstract:
Introduction:
Materials & Methods:
Result:
Discussion:
Reference:

본문내용

Abstract:
이번 실험에서는 E.coli에서 과발현 시켜 정제한 His tagged green fluorescence protein을 항원으로 사용하여 mouse에 세 번 intraperitoneal injection하여 polyclonal antibody인 anti GFP antibody를 얻어낸다. intraperitoneal injection를 할 때마다 Freund`s adjuvant을 섞어서 주사하여 항체생산이 잘 되도록 유도한다. 얻어낸 antibody는 SDS-PAGE로 분리하고, 전기영동 시킨 polyacrylamide gel로부터 무수한 구멍이 있는 nitrocellulose membrane으로 단백질을 이동시켜 단백질의 구조가 재생되면서 본래의 항원 결정기를 갖게 된다. Anti-Mouse IgG-Alkaline Phosphatase와 BCIP/NBT의 보라색 발색반응을 통하여 Colorimetric detection을 한다. 이와 같은 Western blotting을 통하여 목적 단백질을 확인하도록 한다.
Introduction:
항원과 항체의 결합을 살펴보면, 항체는 항원과 상보적으로 결합하며, 또한 그 결합하는 부위의 크기는 항원 전체가 아니고 항원의 일부지역이다. 이와 같이 항체가 결합하는 항원의 일부지역을 antigenic determinant 또는 epitope라고 부른다. 항체는 항원과 직접 결합하며, 항원의 입체구조를 있는 모양 그대로 인식한다. 그러므로 항체의 경우 상보적 결합이라는 말은 항원과 항체의 결합부위의 입체구조가 서로 상보적이라는 말이 된다.
IgG(immunoglobulin G)는 초유에 가장 많이 발견되는 중요한 면역 물질이며 임파액과 순환 계통에 의하여 운반되어 독성 물질과 침입자들을 중화 시킨다. 1994년 임상 실험 결과 장에 체류뿐만 아니라 장을 통과하여 혈장으로 들어가 바이러스를 죽인다.

참고자료

· - 강병철, 세포학, 2000, 한우리, pp.105~114
· - David L.Nelson, Lehninger Principle of Biochemistry 4th ED., 2005, W.H.Freeman and Company, pp.92~93
· - 전진석, 세포학(분자적 접근), 2004, 월드사이언스, pp.98~100
· - 한국생화학회저, 실험생화학(3판), 1999, 탐구당, p. 411-412