DNA ligation, Transformation and Colony Inoculation 레포트

소개글

DNA ligation, Transformation and Colony Inoculation 레포트의 abstraction, introduction, discussion, reference가 있습니다.
transformation은 유전자가 삽입된 plasmid vector를 대장균 세포 속으로 도입하는 과정이다. 이번 실험에서는 DNA를 접합시키는 ligation을 함으로써 인위적으로 재조합시킨 plasmid를 E.coli의 competent cell로 transformation 해보았고, 이를 통하여 유전공학에서 많이 쓰이는 transformation의 기작을 이해하고 그 방법을 이해해보았다. E.coli의 유전형질을 plasmid를 이용한 유전자 도입방법으로 transformation시키고, transformation된 E.coli를 color selection하기 위한 과정까지 수행하였다. 여기서 plasmid는 앞에서 BamHⅠ과 XbaⅠ으로 처리하여 제작해두었던 insert DNA와 vector DNA를 T4 DNA ligase를 이용하여 ligation시켜서 만들었다. color selection을 통하여 α-complementaion까지 생각해보았다. ampicillin inhibitor 유전 물질을 가지고 있는 E.coli는 ampicillin이 포함된 배지에서 생존할 수 있다는 것도 확인해보고자 하는 실험이었다. 그러나 최종적으로 실험 결과 배지에서는 colony가 뜨지 않아서 transformation의 유무는 알 수 없었다.

목차

Abstract:
Introduction:
Materials & Methods:
Result:
Discussion:
Reference:

본문내용

Abstract:
transformation은 유전자가 삽입된 plasmid vector를 대장균 세포 속으로 도입하는 과정이다. 이번 실험에서는 DNA를 접합시키는 ligation을 함으로써 인위적으로 재조합시킨 plasmid를 E.coli의 competent cell로 transformation 해보았고, 이를 통하여 유전공학에서 많이 쓰이는 transformation의 기작을 이해하고 그 방법을 이해해보았다. E.coli의 유전형질을 plasmid를 이용한 유전자 도입방법으로 transformation시키고, transformation된 E.coli를 color selection하기 위한 과정까지 수행하였다. 여기서 plasmid는 앞에서 BamHⅠ과 XbaⅠ으로 처리하여 제작해두었던 insert DNA와 vector DNA를 T4 DNA ligase를 이용하여 ligation시켜서 만들었다. color selection을 통하여 α-complementaion까지 생각해보았다. ampicillin inhibitor 유전 물질을 가지고 있는 E.coli는 ampicillin이 포함된 배지에서 생존할 수 있다는 것도 확인해보고자 하는 실험이었다. 그러나 최종적으로 실험 결과 배지에서는 colony가 뜨지 않아서 transformation의 유무는 알 수 없었다.

Introduction:
DNA ligase는 일반적으로 T4 phage에 감염된 E.coli로부터 생성된 T4 DNA ligase를 많이 사용한다. 이 효소는 뉴클레오타이드의 인산디에스테르 결합을 만들어 줌으로써 끊어진 DNA를 연결시켜 준다. figure.2에서 보는 바와 같이 상보적인 염기의 결합인 점착말단의 ligation이 상보적 염기결합이 전혀 없는 끊어진 두 DNA분자를 연결시키는 평활말단의 연결보다 효율이 높다. figure.3은 제한효소와 DNA ligase를 사용하여 재조합 DNA를 만드는 과정을 설명한 것이다.
형질전환(transformation)이란 플라스미드가 세균 안으로 도입되면서 세균이 가지고 있지 않던 유전형질을 획득하는 것이며 이를 세균의 형질전환 (bacterial transformation)이라고

참고 자료

- 민봉희, 미생물과학, 2001, 도서출판효일, pp.48~51
- 김효중, 미생물학(제 6판), 2005, 라이프사이언스, pp.102~106
- 심웅섭, 분자생물학, 1999, 월드사이언스, p386 ~ 387