생화학 실험 레포트

소개

1. Preparation of Tris-HCl buffer (0.05M, at the appropriate pH)
2. Mini preparation of plasmid DNA ( Alkaline Method)
3. BRADFORD 시약을 이용한 단백질 정량
4. Over expression
5.SDS PAGE(sodium dodecyl sulfate poly acrylamide gel electrophoresis)

위 다섯개의 실험의 각각의 reagent&material, protocol, 실험방법 및 참고사항, 고찰 등이 수록되어있습니다.

A+받은 보고서이니 잘 참고하시어 활용하세요 ^ㅡ^

목차

1. Preparation of Tris-HCl buffer (0.05M, at the appropriate pH)
2. Mini preparation of plasmid DNA ( Alkaline Method)
3. BRADFORD 시약을 이용한 단백질 정량
4. Over expression
5.SDS PAGE(sodium dodecyl sulfate poly acrylamide gel electrophoresis)

위 다섯개의 실험의 각각의 reagent&material, protocol, 실험방법 및 참고사항, 고찰 등이 수록되어있습니다.

본문내용

-SDS PAGE의 특징

*시료를 열처리 하는 이유?

단백질 샘플을 Loading buffer 와 섞어준 다음 gel 에 주입해야 하는데, loading buffer 에는 SDS가 포함되어 있다. 이 SDS 가 단백질을 둘러싸 micelle 을 형성하면 둘러싸인 단백질은 단백질의 사이즈에 비례하는 전하를 가지게 된다. 이때 size 와 둘러싸이는 전하의 양, 즉 SDS의 양을 일치시키려면 꼬여있는 단백질을 일자로 풀어주어야 오차가 적어진다. 단백질이 아주 많이 꼬여있으면 실제 분자량보다 크기가 작아져 SDS 가 많이 둘러싸지 못해 원래보다 작은 분자량에서 나타나게 된다.
즉, SDS 가 단백질을 둘러쌓아서 단백질 크기에 비례하는 전하를 띄게 해줘야 하는데, 단백질이 꼬여있으면 안쪽에는 SDS 가 침투하지 못하므로 가열을 통해 단백질을 풀어줌으로써 SDS 가 단백질의 크기에 비례하여 둘러쌓을 수 있게 해주는 것이다.

*사용되는 buffer의 특징은?

Loading buffer : protein sample을 comb으로 만든 lane에 loading할 때 loading buffer와 섞은 후에 sample을 loading하게 된다. loading buffer에는 SDS, 2-mercaptoethanol, glycerol등이 들어간다. loading buffer는 단백질이 물에 뜨지 않고 가라앉게 하는 역할을 한다.

Running Buffer : 전기영동용 완충용액으로, Glycine과 HCL이 포함되어있어 용액에 전기가 잘 흐르도록 해준다. Running Buffer는 단백질들이 어디까지 내려가고 있는지를 우리 눈으로 확인 할 수 있게 해준다.

*gel이 두 가지로 나눠져 있는 이유는?

참고자료

· 없음