단백질 발색반응 및 정량

소개

학교다닐때 실험한 내용입니다
참고하세요

목차

◎ Material
◎ Principle
√ Ninhydrine reaction의 원리
✓염에 의한 protein 침전반응
✓ Sodium sulfate를 albumin에 가해주는 이유?
✓ 원심분리(centrifugation)
√ 단백질 정량
UV법 (분광학적 정량법)
뷰렛법
Lowry법
BCA법(BCA 단백질 assay방법)
Kjeldahl법
전기영동법
BSA(Bovine serum albumin)
Bradford법

◎ Method
Ninhydrine reaction
염에 의한 침전
Protein 정량
◎ Result

본문내용

◎ Principle
√ Ninhydrine reaction의 원리
Ninhydrine을 Amino acid의 solution에 가하면 보라색으로 변하는 발색반응이다. 즉, Ninhydrine을 Amino acid의 중성용액에 가하면 아미노기의 작용에 의해서 Ninhydrine 2분자가 축합하여 Amino acid의 종류에 따른 특유한 색을 나타낸다. 예를 들면, Histidine은 청색, Hydroxyproline은 오렌지색으로 변한다. 이 발색은 예민하여 50~100만분의 1정도의 감도를 나타내므로 Amino acid의 검출에 이용된다. Amino acid을 paper chromatography등으로 전개하고 0.3% Ninhydrine의 buthylalcohol solution을 분무하여 전 Amino acid을 검출 확인하는 방법이 흔히 쓰인다. 또, 비색정량에도 이용된다.
Ninhydrine reaction은 α-아미노기를 가진 화합물이 나타내는 정색반응(β-, γ-는 정색반응이 불가능)이며 protein뿐만 아니라 유리아미노산, Amino acid로 구성된 펩타이드류, 그 이외에 아민의 Ninhydrine solution을 가한 후 중성에서 가열할 때 나타나는 보라색의 정색반응이다. Lowry방법의 원리는 Biuret법과 거의 같지만 Folin-Ciocalteu시약을 이용한다는 것이 다른 점이다. <참고1>

✓염에 의한 protein 침전반응
바깥 온도의 영향을 받지 아니하고 항상 일정한 온도를 유지하도록 만든 용기로 각종 생물조직과 세포에 대한 연구 및 대사과정, 미생물 반응, 효소 반응 등의 정밀한 온도 제어와 시료의 연속적인 교반이 필요한 실험, 외부 기기의 냉각수 공급 등 각종 발열 제품의 냉각 및 항온용으로 사용 적합하다. 100℃로 끓이면 효소나 반응 물질은 denature 되고 더 이상 반응은 일어나지 않게 되므로 일반적 단백질, 효소 반응실험은 사람체온에 가까운 37℃로 맞추어 실험을 한다.

저온 항온조 · 가열 항온조 · 초저온 항온조 · 진동 항온조 등이 있다.

참고자료

· 없음