transformation결과보고서 트렌스포메이션

소개

트렌스포메이션 결과보고서입니다.
과정과 고찰 상세하게 적어놓았습니다.

목차

introduction -

Material

Method

결과에 대한 고찰

실험의 전반적인 설명

4도씨에서 작업하는이유

transformation buffer 를 넣은후 원심분리시 도너츠 모양 pellet 이 형성되는이유

실험시 주의사항

vector 의 요건

본문내용

gene cloning 이란 DNA 를 자르거나 붙이는 등의 조작을 거쳐 세포에 도입하고 복제함으로써 무수히 많은 DNA 사본을 얻는 유전적 공학 기법으로
Mini prep - > Digetion -> Ligation -> Transformation -> cracking -> Mini prep -> Digetion ....... 의 순서로 진행된다
우리는 이 클로닝 과정중 transformation 과정을 배우기위해서 이 실험을 한다.
transformation 앞 과정인 Ligation 까지는 조교선생님께서 실험을 해오셨기 때문에 transformation 과정부터 실험하였다.
transformation 은 유전자가 삽입된 vector 을 bacteria 세포내로 주입하는 과정으로 DNA 를 세포에 주입하는 것이다. 그래서 외부로부터 주어진 DNA에 의해서 생물의 유전적인 성질이 변하는것이다.
우리가 실험에서 사용한 bacteria 숙주세포는 HB101 로 사용하였고 이 숙주세포에 Ligation 된 insert 가 들어가있는 vector DNA를 주입하여 AP 처리된 배지를 통하여 결과를 관찰하는 실험을 한다.

Competent cell ?
DNA를 Cell 표면에 잘 붙게 하고 세포 외부에 DNA침전을 도와주고 DNA의 인지질 유동성이 높아 전하를 변형시켜 숙주세포에 잘들어가도록 해준다.

Material
필요시약
Washing Buffer : 10mM MOPS(pH 7.0) , 10mM RbCl -> Autoclave
Transformation Buffer : 0.1M MOPS(pH6.5) , 50mM CaCl2 , 10mM RbCl -> Filter
DMSO : DMSO의 산화물은 transformation 을 억제. 빛이 통하지 않는 Bottle 에 둠.
LB Media(Ap-) LB plate (Ap+)
Host Cell (HB101) : 실험 전날 culture

참고자료

· http://blog.naver.com/dextermh?Redirect=Log&logNo=10010236663
· http://blog.naver.com/tamiru?Redirect=Log&logNo=150001417792
· http://blog.naver.com/dextermh?Redirect=Log&logNo=10010236507
· http://blog.naver.com/h2hiro28?Redirect=Log&logNo=140037000384