PCR 및 gene cloning의 전반적인 내용 요약

소개

PCR primer 제작과 종류 및 원리
gene cloning의 종류 및 vector 종류, hybridization에 대해 요약하였습니다.

목차

Chapter 6.
1.PCR
2.PCR의 특징
3. Touchdown PCR
4. PCR primer design.
5. Random primer
6. PCR template
7. PCR의 적용(LCR, Q-PCR, real time PCR,TagManassay)

Chapter 7.
1. DNA cloning.
2. Cloning 방법
3. restriction endonuclease
4. Plasmid
5.Vector 종류 및 원리
-pBR322
-bacteriophage
-BAC
-YAC
6.Hybridization
7.expression vector
8. protein modification 및 tag(GST-GSH)

본문내용

▶Restriction endonuclease(제한효소)의 종류
이들의 다양하며 이들은 두가지 end를 만들어 내는데 두 개의 DNA 가닥에서 같은 위치를 인식하여 잘라 절단 면을 형성하여 blunt end를 형성하는 것과 DNA 가닥의 다른 위치를 인식하여 잘라 한 부위가 튀어나온 sticky end가 있다.
서로 sticky end를 가진 DNA fragment들은 연결 반응을 매우 빠르게 진행시키지만 서로 다른 제한효소로 처리한 가닥끼리는 연결되지 않는다. 반면 blunt end를 가진 DNA fragment는 sticky end보다 낮은 효율로 결합하지만 blunt end를 만드는 여러 다른 제한효소로 잘린 가닥과도 연결될 수 있다. 이런 제한효소로 잘린 vector에 삽입되는 몇 종류의 제한효소자리를 가지는 DNA fragment를 linker라고 부른다. 또한 DNA fragment에 여러 자리의 제한효소자리를 가지는 것을 polylinker라고 한다. 이 부위에는 제한효소로 처리하여 추가적인 DNA fragment를 집어 넣을 수 있다.

▶Plasmid(vector라고도 할 수 있음. vector란 cell에 gene를 넣기 위한 도구이기 때문임)
plasmid는 host chromosome과는 별개로 자가 복제될 수 있는 작은 circular DNA임.
transformation과정을 거쳐 세균 세포 내로 도입가능함.
약한 열을 가하여 세포벽을 얇게 하는 heat shock과 전기충격을 주어 세포벽에 작은 구멍을 내는 electorphoration을 통해 세포 내로 도입이 가능함.
plasmid가 세포 내로 들어간 것을 확인하기 위해서는 plasmid 내에 selectable maker라는 항생제 저항성이나 필수 아미노산을 만들어내는 gene이 필요함.
대표적인 예) pBR322, bacteriophage, BAC, YAC

참고자료

· -1. DAVID, MICHAEL(2005), Lehninger principles of biochemistry(4th), W.H.Freeman and Company
· -2. 기타 수업자료 및 강의를 요약.