plasmid purification

소개

예비보고서입니다~

목차

1. 실 험 제 목 : Plasmid Purification
2. 실 험 날 짜
3. 이 름
4. 실 험 목 적
5. 실 험 원 리
8. 시약 및 기구
9. 실험방법

1. 실 험 제 목 : DNA 전기영동
2. 실 험 날 짜
3. 이 름
6. 실 험 목 적
7. 실 험 원 리
8. 시약 및 기구
9. 실 험 방 법

본문내용

4. 실 험 목 적
플라스미드 DNA는 박테리아의 DNA에 비해 크기가 매우 작고, 상보적인 두 가닥의 DNA 사슬이 공유결합으로 연결된 원형을 유지한다. 따라서 이러한 차이를 이용하여 CsCI 밀도 기울기 법에 의해 플라스미드 DNA를 떼어 낼 수 있다. 이 실험에서는 Alkaline lysis product를 이용하여 Plasmid DNA를 분리한다.

5. 실 험 원 리

7-1. 플라스미드란?
⇨ 여러 세포들은 염색체 DNA와는 독립적으로 복제 할 수 있는 염색체의 DNA를 포함하는데 이러한 DNA 함유 성분을 플라스미드라고 한다. 플라스미드는 독립적으로 복제 할 수 있도록 하는 자기 복제 기점을 갖고 있다는 특징을 가진다.

7-2. 플라스미드 DNA의 분리정제
-세포 내 DNA 분리방법과 비슷하다.
① 플라스미드 함유 배양세포를 액체배지에서 배양, 수거하여
② DNA추출을 위한 세포추출물을 뽑아내고,
③ DNA 추출 후 단백질을 제거하고
④ 단백질 제거 후 남아 있는 RNA를 제거한 후,
⑤ 에탄올로 DNA를 침전 시키면 우리가 원하는 플라스미드를 얻을 수 있다.

보충) 플라스미드를 정제는 total cell DNA의 일반적인 분리방법과 같다. 플라스미드를 지니는 세포를 액체배지에서 배양하여 수확하고 cell extract를 하면 된다. extract는 단백질을 제거하고 에탄올침전으로 DNA를 응축시킬 수 있다. 그러나 total cell DNA 분리와 plasmid 정제와는 중요한 차이점이 있다. 플라스미드 분리는 일반적으로 많은 양의 chromosomal DNA 로부터 분리하여야 한다. 플라스미드 분리방법은 플라스미드 DNA와 bacterial DNA의 물리적인 차이점에 의해 분리되며 가장 큰 플라스미드의 길이는 E. coli 의 염색체 길이에 8%밖에 되지 않으며 대부분이 작다.
플라스미드와 bacteria DNA의 구조의 차이로부터 분리하는 방법이 있다. 플라스미드와 염색체는 구형인데 염색체는 extract시 구형에서 선형조각으로 깨어지며 플라스미드에는 구형으로써 변화가 없다. 이 구조적인 차이점을 이용하여 정제된 플라스미드를 얻을 수 있다.

참고자료

· 기초생화학책