핵산 정량 및 전기영동

소개

핵산 정량 및 전기영동

목차

Ⅰ. Introduction
ⅰ. Origin - 3
ⅱ. Goal of experiment - 4

Ⅱ. Material and procedure
ⅰ. Material - 4
ⅱ. procedure - 4
⑴ 흡광도 측정
⑵ Agarose gel (2%)만들기
⑶ 전기영동

Ⅲ. Result and discussion
ⅰ. Result - 5
ⅱ. discussion
⑴ 핵산의 정량 분석
⑵ 정어리 핵산 전기영동 실험에 실패한 요인추측

본문내용

⑵ Agarose gel (2%)만들기
① Agarose 2g, D.W 90㎖, TAE-buffer 10㎖와 Magnetic bar를 비커에 넣고 Stirrer 위에서 끓인다.
② 판에 붓고 Comb를 꽂아 놓고 15분 정도 실온에 방치한다. (굳을 때까지)
③ TAE-buffer에 보관한다.

⑶ 전기영동
① Stock solution 10㎕와 Dye 2㎕, Marker 10㎕와 Dye 2㎕를 Parafilm위에서 pipetting하여 잘 섞어준다.
② Tank에 TAE-buffer 30㎕와 D.W 270㎕ 넣고 Agarose gel에 loading한다.
③ 150V에서 20분 동안 전기영동 건다.
④ D.W 20㎖와 EtBr 200㎕를 통에 넣어서 10분 동안 staining한다.
(*주의 :EtBr은 강력한 mutagen이므로 필히 장갑을 끼고 작업한다.)
⑤ D.W 20㎖로 20분 동안 destaining한다.
⑥ Gel document에 gel을 넣어 UV로 쬐고 Marker와 비교하여 band를 확인한다.
⑦ Stock solution, Marker, Dye는 냉동 보관한다.
Ⅲ. Result and discussion
ⅰ. Result
ⅱ. discussion
⑴ 핵산의 정량 분석
보통 200~400nm 사이를 UV, 400~500nm 사이를 가시광선 영역이라 한다. 정어리 핵산을 이용하여 정량을 하기 위해서는 UV법에 대해 알아야 한다. 단백질에 있는 티로신, 페닐알라닌 및 트립토판의 aromatic 잔기들은 각각 275nm와 280nm의 자외선을 흡수한다. 많은 단백질들에 있어서의 이 아미노산들의 합친 수준은 거의 일정하므로 단백질의 농도는 280nm에서의 흡광도와 비례하게 된다. 물론 예외가 있기는 하지만 순수한 단백질의 경우 단백질의 농도가 1mg/ml이고 자외선이 통과하는 경로가 1cm일 때 280nm에서의 흡광도는 1.0이다. 따라서 대부분의 순수한 단백질의 농도는 280nm에서의 흡광도를 측정함으로써 신속히 결정할 수 있다. 이 방법은 정량하는 데 시간이 적게 들 뿐만 아니라 정량하고 난 후의 단백질을 완전히 회수하여 재이용할 수 있는 이점이 있다.

참고자료

· 없음