Isolation, subfractionation, and enzymatic analysis of beef heart mitochondria

소개

생화학실험 중 하나인 Isolation, subfractionation, and enzymatic analysis of beef heart mitochondria에 대한 예비보고서와 결과보고서입니다.

목차

<예비보고서>
1. 실험제목

2. 실험목적

3. Introduction & Content
⑴Mitochondria의 구조
⑵mitochondria의 기능
⑶intact mitochondria의 분리
⑷mitochondria의 Subfractionation
⑸mitochondria와 SMPs의 characterization
⑸Centrifuge에 대하여

4. Reference

<결과보고서>
1. Introduction
⑴실험 제목
⑵실험 목적

2. Materials & Procedure
⑴시약 및 초자
⑵실험 과정

3. Result : Tube2에서의 absorbance에 대한 plotting graph

4. 결과 분석 및 해석
⑴plotting된 graph에 대한 해석
⑵Malate dehydrogenase의 specific activity 계산하기

5. Discussion
⑴매 과정마다 Tris를 넣어서 pH를 맞춰주는 이유?
⑵ice-cold homogenizing solution에 sucrose가 포함되는 이유?

6. Reference

본문내용

<예비보고서>
1. 실험제목 : Isolation, subfractionation, and enzymatic analysis of beef heart mitochondria
2. 실험목적 : beef heart muscle에서 mitochondrial fraction을 분리하고 protein content에 대해서 분석하며, 각각을 submitochondrial particle로 fractionate하여 malate dehydrogenase & monoamine oxidase activity에 대해 분석한다.

3. Introduction & Content
⑴Mitochondria의 구조
①double membrane : smooth outer membrane(permeable), inner membrane(unique transport & protein, enzyme 존재)
②intermembrane space, matrix : 각각 다른 생물학적 기능을 나타냄

⑵mitochondria의 기능
=> aerobic (oxygen dependent) metabolism of the cell에 관여한다.
①cristae에 존재하는 효소들은 citric acid cycle, respiratory chain, and beta fatty acid oxidation에 필요한 효소들이다.
②독립적인 DNA를 가지고 있어 protein enzyme에 필요한 mRNA 합성이 가능하다.

⑶intact mitochondria의 분리
=>크기가 크기 때문에 분리하는데 유리하다. 주로 쓰는 방법은 differential centrifugation of homogenized tissue이다.
--->mitochondrial fraction(major compartments), lysosomes, cell fragments, nuclear fragments, microbodies(peroxisomes)로 분리되며, 다음과 같은 순서로 mitochondrial fraction을 준비한다.

참고자료

· <예비보고서>
· - Modern Experimental Biochemistry, 3rd ed., Rodney Boyer.
· - Merck index, 12th ed., CambridgeSoft.
· - Biochemistry, 5th ed., Stryer, Berg, Tymoczko, Freeman publishing
· - http://www.elmhurst.edu/~chm/vchembook/591cellstruct.html
· - http://www.medal.org/visitor/www%5CActive%5Cch41%5Cch41.01%5Cch41.01.01.aspx
· - http://library.thinkquest.org/20991/gather/formula/data/189.html
· <결과보고서>
· - Modern Experimental Biochemistry, 3rd ed., Rodney Boyer.
· - Merck index, 12th ed., CambridgeSoft.
· - Biochemistry, 5th ed., Stryer, Berg, Tymoczko, Freeman publishing