Isolation and characterization of bovine milk α-lactalbumin

소개

생화학실험 중 하나인 Isolation and characterization of bovine milk α-lactalbumin에 대한 결과보고서입니다.

목차

1. Introduction
⑴실험 제목
⑵실험 목적

2. Materials & Procedure
⑴시약 및 초자
⑵실험 과정

3. Result
⑴SDS-PAGE로 분석된 결과값
⑵UV spec의 결과
⑶Bradford Assay(595nm)의 결과 - 보정된 값으로 취함

4. 결과 분석 및 해석
⑴SDS-PAGE에서 나타난 α-lactalbumin의 분석
⑵UV spec에서 계산한 α-lactalbumin의 concentration
⑶Bradford Assay에서 계산한 α-lactalbumin의 concentration

5. Discussion
⑴SDS-PAGE에서 얻은, 이번 실험에서의 α-lactalbumin ladder에서 다른 spot들의 정체?
⑵SDS-PAGE에서 측정된 α-lactalbumin의 질량과 실제 문헌에서의 α-lactalbumin의 질량이 다르게 측정된 이유? - marker에 대한 고찰
⑶α-lactalbumin의 농도를 측정한 두 실험방법(UV spec, Bradford Assay)에서 각각의 결과가 다르게 나타난 이유?
⑷zero point 값으로 보정해주고 난 각 sample들의 absorbance들이 (-)값을 이루는 경우?
⑸Bradford Assay에서 보정곡선 중, linear한 부분을 잡아서 그 부분을 이용하여 α-lactalbumin의 농도를 구한 것은 올바른가?

6. Problem 풀이 : 문제 2번, 4번, 9번
⑴문제 2번 : 이번실험에서 purification된 α-lactalbumin의 purity의 extent를 결정하기 위해 사용할 수 있는 분석 방법에는 어떤 것이 있는가?
⑵문제 4번 : SDS-PAGE에서 α-lactalbumin의 mobility는 다음의 변화에 대해 어떻게 영향을 받을 것인가?
⑶문제 9번 : 이번 실험에서 사용된, 280nm에서의 column fraction의 absorbance 측정은 protein material의 존재를 감지하기 위해 사용되었다. 이 방법이 protein concentration의 양적인 결정을 할 수 있다고 생각하는가? 이 측정을 방해하는 어떤 다른 생체분자들이 존재하겠는가?

7. 참고문헌

본문내용

1. Introduction
⑴실험 제목 : Isolation and characterization of bovine milk α-lactalbumin
⑵실험 목적 : α-lactalbumin과 metal ion-IDA-agarose affinity chromatography에 대해 알고, 이를 이용하여 α-lactalbumin를 whey에서 isolation & purification한다.

2. Materials & Procedure
⑴시약 및 초자
- Immobilized iminodiacetic acid gel : IDA
- Disposable plastic columns
- Collection tubes
- UV-VIS spectrometer & UV-quartz cuvettes
- Syringe, 30㎖ & syringe cartridge filter, 0.45㎛
- 0.1M
- Buffer A : 0.02M Tris, 0.5M NaCl, pH 7.0
- Buffer B : 0.02M Tris, 0.5M NaCl, 0.02M Imidazole, pH 7.0
- Nonfat milk : skim milk, 5%

⑵실험 과정
①gel을 column에 packing 시킨다.
=>size-exclusion chromatography의 경우 column을 길고 가늘게 만들어주는 것이 분리에 유리함에 비해, affinity chromatography의 경우 짧고 굵게 만들어야 불순물이 분리되어 나오지 않는다.

=>IDA-agarose 위와 아래는 disc를 삽입하는데, 아래쪽의 disc는 IDA-agarose이 밑으로 빠지지 않도록 하는 역할을 하며, 위쪽의 disc는 용액을 부었을 때 IDA-agarose의 표면에 interruption이 일어나지 않도록 평평함을 유지시켜주는 역할을 한다.

참고자료

· - Modern Experimental Biochemistry, 3rd ed., Rodney Boyer.
· - Merck index, 12th ed., CambridgeSoft.
· - Pre-Stained Protein Standards manuals
· - Biochemistry, 5th ed., Stryer, Berg, Tymoczko, Freeman publishing
· - http://www.organic-chemistry.org/chemicals/reagents.htm
· - http://orgchem.colorado.edu/hndbksupport/TLC/TLC.html
· - http://nationaldiagnostics.com/article_info.php/articles_id/4
· - http://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/bv.fcgi?rid=stryer.figgrp.292