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Plasmid DNA isolation and characterization by electrophoresis - 결과보고서

생화학실험 중 하나인 Plasmid DNA isolation and characterization by electrophoresis에 대한 결과보고서입니다.
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최초등록일 2009.05.01 최종저작일 2005.09
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Plasmid DNA isolation and characterization by electrophoresis - 결과보고서
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    소개

    생화학실험 중 하나인 Plasmid DNA isolation and characterization by electrophoresis에 대한 결과보고서입니다.

    목차

    1. Introduction
    ⑴실험 제목
    ⑵실험 목적
    ⑶배경지식 - plasmids
    ⑷실험 상의 개요 - Isolation of plasmid DNA - Microscale alkaline lysis method

    2. Materials & Procedure
    ⑴시약 및 초자
    ⑵실험 과정

    3. Result
    ⑴Electrophoresis를 실행한 결과 나타난 DNA ladder
    ⑵DNA 뽑은 결과물의 농도 - Absorbance
    ⑶DNA ladder들에 대한 설명

    4. Discussion
    ⑴각각의 시약의 역할
    ①STET buffer(0.05M glucose, 0.01M EDTA, 0.025M Tris-HCl, pH 8.0)
    ②NaOH
    ③SDS
    ④Potassium acetate
    ⑤EtOH

    ⑵Electrophoresis의 결과에서 알 수 있는 사실
    ⑶pcDNA3.1(+)의 properties
    ⑷electrophoresis가 끝난 뒤의 현상

    5. Problem 풀이
    ⑴[14-7] glycerol과 bromophenol blue dye를 gel-loading buffer에 넣는 이유?
    ⑵[14-8]polyacrylamide electrophoresis가 대부분의 plasmid DNA에 적당하지 않은 이유는?
    ⑶[14-9]bromophenol blue dye와 plasmid DNA의 상대적인 electrophoretic mobility에 적용되는 가정은 무엇인가?
    ⑷[14-10]ethidium bromide가 gel electrophoresis에서 사용되는 이유는 무엇인가?

    6. 참고문헌

    본문내용

    1. Introduction
    ⑴실험 제목 : Plasmid DNA isolation and characterization by electrophoresis
    ⑵실험 목적 : 이 실험은 학생들에게 microorganism에서의 DNA를 isolation하고 partial
    purification하는 일반적인 방법을 소개한다.
    ⑶배경지식 - plasmids

    .. 중략 ..

    2. Materials & Procedure
    ⑴시약 및 초자
    - E.Coli (must contain any vector)
    - LB (antibiotics를 가지고 있는 LB)
    - STET buffer (0.05M glucose, 0.01M EDTA, 0.025M Tris-HCl, pH 8.0) + lysozyme 1mg/㎖
    - Alkaline - SDS solution (0.2N NaOH, 1% SDS)
    - 5M potassium acetate
    - TE (pH 8.0)
    - EtOH (100%, 70%의 농도를 가진 에탄올이 쓰인다)
    - Agarose gel electrophoresis : precast agarose plates, ethidium bromide solution, electrophoresis buffer, gel-loading buffer, electrophoresis chamber, power supply, UV lamp, DNA molecular marker(DNA ladder : 50~3000bp 사이)

    ⑵실험 과정
    ①1.5ml cultured soap를 튜브에 옮긴다.
    =>cell harvest의 과정이다.
    ②2분동안 centrifuge한 뒤, 피펫으로 supernatant를 제거한다.

    참고자료

    · *Modern Experimental Biochemistry, 3th ed., Rodney Boyer.
    · *Merck index, 12th ed., CambridgeSoft.
    · *Biochemistry, 5th ed., Berg, Tymoczko, Stryer, Freeman publishing.
    · *https://catalog.invitrogen.com/index.cfm?fuseaction=viewCatalog.viewProductDetails&productDescription=5096
    · *http://images.google.co.kr/images?q=supercoil+&svnum=10&hl=ko&lr=&newwindow=1&start=0&sa=N
    · *http://www.madsci.org/posts/archives/feb99/919869466.Mb.r.html
    · *http://www.izotop.hu/newprods.htm
    · *http://www.promega.com/enotes/faqspeak/0003/fq0019.htm
    · *http://biotech.biology.arizona.edu/labs/Electrophoresis_dyes_stude.html
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