E.coli 의 Growth curve in real fermentor

소개

real fermentor에서 E.coli의 성장을 관찰해서 Growth curve를 나타낸 자료입니다.

목차

Abstract
1.서 론
2. 실험 재료 및 방법
3. 결 과
4. 고찰
5. 결론

본문내용

1. 서 론

발효조는 미생물 배양시 정량적 연구가 필요할때, 대량생산하고자 할때, 혹은 환경요인 등을 조절하고자 할 때, 사용하는 system이다.



발효조에 사용되는 생체촉매는 효소, 미생물, 동물세포 및 식물세포가 있으며 이 생체촉매를 현탁(suspension) 상태 또는 고정화 하여(immobiliz
ed) 사용한다. 생물공학 제품을 생산하기 위하여 발효조를 설계, 제작 및 운전하는 것은 생물공학도가 해야 할 일 중의 하나이다. 발효조를 설계할 때 고려해야 하는 중요한 사항은 기질(substrate)을 생성물로 전환시키는 속도(conversion rate), 생성물 수율(product yield), 생성물 농도, 생산성(productivity)을 높이는 것이며, 연속 배양인 경우에는 장기간 교체 없이 사용할 수 있는 효소고정화 또는 세포 고정화 방법을 활용하는 것이다. 본 실험에서는Escherichia coli를 real fermentor에서 배양시켜, 균의 Growth curve을 잡아 균의 생장 system을 알아보며 다음 실험인 fermentor 제작에 활용한다.


2. 실험 재료 및 방법

2.1 Growth curve
2.1.1 균주의 선택 및 전배양
전배양은 본 배양에 앞서 균주의 활성도를 올리기 위해 하는 것으로 본 배양에서의 유용성을 높여주며 실험의 안정성을 높이기 위해 사용된 다.
앞선 실험결과에 의해 밝혀진 배지의 최적조건을 맞추어 주기 위해 ammonium sulfate 3%와 glucose 1%를 LB액체배지에 첨가하였다. 이 배지 100㎖에 single colony에서 한 백금이 채취한 E. coli 를 접종하여 37℃에서 24시간 배양한다.

2.1.2 O.D, CFU 값 측정
Fermenter를 이용하여 E.coli를 배양하며 앞선 실험과 마찬가지로 밝혀진 배지의 최적조건인 LB broth에 1% glucose와 3% ammonium sulfate를 첨가한 배지 1ℓ에 전배양한 배지를 100㎖를 접종한 후 37℃에서 배양한다. 약 2시간 간격으로 O.D를 측정한다.
오염유무와 CFU 측정을 위해 LB평판배지에 10-6으로 희석하여 배양액 100㎕씩 접종한 뒤 도말한다. 각각 12hr 배양 후 colony 수로 CFU를 확인한다

2.2 균주의 단일성 확인
2.2.1 확인 방법
보유한 균주의 오염여부를 확인하는 작업으로 streaking을 하여 단일 colony의 생성유무를 확인하고, 생성된 colony의 형태, 색, 균사 및 광택의 유무 등을 확인하여 균주의 단일성을 확인한다. 모든 실험 과정 중 사용균주의 오염 유무와 사용하는 균주가 E.coli 임을 확인하기 Gram 염색법을 사용하여 증명한다.

참고자료

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