미꾸라지 간으로부터 포스포리파아제 C델타 단백질의 생화학적 특성

서지정보

· 발행기관 : 한국어병학회
· 수록지 정보 : 한국어병학회지 / 18권 / 1호 / 67 ~ 80페이지
· 저자명 : 서정수, 정준기, 이형호, 임상욱, 김나영, 이상환, 오현석

초록

미꾸라지 (mudloach, Misgunus mizolepis)의 간으로부터 클로닝한 phosphoinositide-specific phospholipase Cδ (ML-PLCδ)를 대장균 (E. coli)에서 과발현시켜 만든 재조합 ML-PLCδ와 미꾸라지 간 조직으로부터 직접 정제한 ML-PLCδ의 생화학적 특성을 비교분석하였다. 우선, pET28a vector (Novagen)를 이용하여 E. coli BL21(DE3)에서 과발현된 재조합 ML-PLCδ은 Ni2+-NTA affinity 크로마토그래피 및 gel filtration 칼럼에 의해서 정제되었다. 미꾸라지 간 조직으로 ML-PLCδ는 open heparin 칼럼 및 분석용 heparin 칼럼등을 통하여 부분 정제하였다. 두개의 재조합 및 wild ML-PLCδ는 phosphatidylinositol 4,5-bis-phosphate (PIP2)에 대한 농도 의존적 PLC 활성을 보여주었고, 그 활성은 포유류 PLCδ 효소와 유사하게 칼슘 농도에 의존적인 활성을 나타내었다. 재조합 및 wild ML-PLCδ는 각각 pH 7.0 및 7.5에서 가장 큰 PI-가수분해 활성을 나타낸다는 사실을 알 수 있었다. 게다가, 재조합 및 wild ML-PLCδ는 sodium doecylcholate (SDC) 및 phosphatidylethanolamine (PE), phosphatidylcholine (PC)와 같은 지질류에 대하여 농도의존적인 활성을 나타내나, spermine과 같은 polyamine류의 존재하에서는 농도 의존적으로 PLC 활성이 감소됨을 알 수 있었다. 미꾸라지 각 기관들의 ML-PLCδ의 발현양상 및 양등을 측정하여 보았을 때 ML-PLCδ는 포유류 PLCδ와 마찬가지로 다양한 형태의 PLCδ가 존재함을 알 수 있었다. 이와 같은 결과들로 미루어서 미꾸라지로부터 얻은 ML-PLCδ는 포유류의 PLCδ isozymes과 유사한 형태의 생화학적 특성을 가지나, 포유류 PLCδ1과 PLCδ3 isozyme의 생화학적 특성을 함께 가짐을 알 수 있었다.

참고자료

· 없음