재조합효소-중합효소 증폭법(RPA) 및 중합효소 연쇄반응법(PCR)에서 생성된 특이 DNA 증폭산물 간의 비교 (Comparison Between Specific DNA-amplifications using Recombinase Polymerase Amplification (RPA) and using Polymerase Chain Reaction (PCR))

서지정보

· 발행기관 : 한국양봉학회
· 수록지 정보 : Journal of Apiculture / 32권 / 1호 / 41 ~ 50페이지
· 저자명 : 김정민, 임수진, trungatai, 왕지희, 이칠우, 윤병수

초록

재조합효소-중합효소 증폭법(Recombinase Polymerase Amplification; RPA)은 등온에서 특이 DNA 를 빠르게 증폭시킬 수 있는 방법이다. 근래 RPA는, 특이 병원체가 보유한 특이 염기서열의 증폭을 통하여, 특이 병원체들을 검출하는데 다양하게 응용되고있다. 본 연구는 꿀벌 병원체에 대한 검색방법으로RPA법을 적용하는 과정에서 RPA에 의한 특이 유전자의 증폭은 중합효소연쇄반응(PCR)에 의한 특이 유전자의 증폭과 유의미하게 다르다는 것을 발견하였다. RPA에 의한 특이 유전자의 증폭물의 양은 같은시간 조건하의 PCR에 의한 특이 유전자 증폭산물의양에 비하여 빠르게 증가되나, 증폭산물 중 중 목적한특이 염기서열의 양은 RPA에 의한 것이 PCR에 의한것에 비하여 크게 낮은 것으로 측정되었다. 목표 기질이 존재한 RPA의 특이 유전자 증폭에서, 특이DNA의증폭과 함께 상당한 양의 비특이DNA들이 만들어 지며, 더욱이 목표 기질이 존재하지 않는 RPA의 특이유전자 증폭에서도, 비특이 DNA양은 증가되는 것이발견되었다. 특정 병원체의 검출을 위한 RPA의 응용을 위하여 RPA에 의한 특이 증폭에서 비특이적 DNA 가 다량 생성되는 점은 마땅히 극복되어야 할 것이다.

영어초록

RPA (Recombinase Polymerase Amplification) is a rapid, specific DNA-amplification method under isothermal condition. Recently, RPA was variously applied to detect specific pathogens using amplification of specific nucleotide sequence from specific pathogen. In this study, it was found that specific DNA amplification using RPA is significantly different than specific DNA amplification using PCR, during application of RPA to detect specific pathogens in honeybee. DNA-quantity of specific DNA amplification using RPA is more rapidly increased than DNA-quantity using PCR under same condition of time. However, it was estimated that quantity of specific nucleotide sequence among DNA amplification using RPA was very lower than quantity of specific nucleotide sequence using PCR. In specific amplification using RPA with target template, specific DNA and also significant quantity of unspecific DNAs were produced. In addition, it was also found that quantity of unspecific DNAs is increased in specific amplification using RPA without target template. For the RPA-application to detect specific pathogens, it should be overcome that unspecific DNAs are mass-produced by specific amplification using RPA.

참고자료

· 없음