Loop-mediated Isothermal Amplification (LAMP) 법을 이용한 Sacbrood Virus (SBV)의 검출법 개발 (Development of Method for the Detection of Sacbrood Virus by Loop-Mediated Isothermal Amplification)

서지정보

· 발행기관 : 한국양봉학회
· 수록지 정보 : Journal of Apiculture / 26권 / 4호 / 267 ~ 274페이지
· 저자명 : 이보람, 노지나, 유미선, 윤병수

초록

Sacbrood virus (SBV)는 꿀벌의 전염성 질병으로감염되면 번데기가 되지 못하고 죽게 된다. LAMP 는 thermocycler 같은 고가의 장비없이도 유전자를증폭할 수 등온증폭방법으로, 본 연구에서는 쉽고빠르게 SBV를 진단할 수 있는 SBV-LAMP법을 개발하였다. SBV 특이 염기서열을 인식하는 SBV-F3/B3/FIP/BIP, 4개의 primer를 사용하여 57°C의 등온조건 하에서 60분간 정치하여 DNA가 성공적으로증폭됨을 확인하였다. 1×103copies/μl까지 증폭이가능하며 실제 꿀벌에서도 검출가능함이 확인되었고, SYBR Green I, Gene-FinderTM Nucleic acid fluorescent dye와 phenol red를 사용하여 전기영동 없이육안으로 관찰할 수 있다. 따라서 SBV-LAMP는 현장에서 적용가능할 뿐만 아니라 감염여부도 쉽게모니터링 할 수 있을 것으로 사료된다.

영어초록

Sacbood virus (SBV) is an infectious disease which affects the brood of honeybees, resulting in failure to pupate and death. A loop-mediated isothermal amplification (LAMP) assay allows one-step detection of gene amplification without expensive equipment such as thermocycler. The SBV-LAMP method was developed for detection of SBV easily and rapidly. A set of four designed primers named SBV-F3/B3/FIP/BIP that recognize SBV specific sequence. After optimization of conditions, SBVspecific amplification was successfully performed using SBV-LAMP from standard A. SBV-specific template under isothermal conditions at 57°C within 60 minutes. The method could be detected SBV in DNA clone at 103copies/μl, also could be applied not only DNA but also field samples. Especially,this method was developed direct detection analysis by the naked eye using SYBR Green I, Gene-FinderTM Nucleic acid fluorescent dye and phenol red. SBV-LAMP may be expected to be useful for the specific detection of SBV in field and for the monitoring of natural infection in Apis mellifera by SBV.

참고자료

· 없음