Loop-mediated Isothermal Amplification (LAMP) 법을 이용한 Nosema Ceranae 검출법 개발 (Development of Method for the Detection of Nosema Ceranae by Loop-Mediated Isothermal Amplification)

서지정보

· 발행기관 : 한국양봉학회
· 수록지 정보 : Journal of Apiculture / 25권 / 4호 / 267 ~ 274페이지
· 저자명 : 이보람, 노지나, Nguyen Van Phu, 유미선, 박용하, 윤병수

초록

노제마병(Nosema disease)은 편성 세포기생충(obligate intracellular parasites)인 Nosema apis (N. apis)와Nosema ceranae (N. ceranase)에 의하여 야기되는 질병이다. 최근에 N. ceranase는 Apis cerana뿐만 아니라 Apis mellifera에서도 종종 발견된다. N. ceranase는N. apis보다 병원성과 독성이 강하다고 알려져 있다.
본 연구에서는 N. ceranae를 특이적으로 검출하는LAMP법을 개발하였다. N. ceranae small subunit ribosomal RNA gene (GenBank, DQ486027)을 바탕으로 N. ceranae 특이primer 4개(Nosema-F3/B3/FIP/BIP)를 설계하였다. pBX-Nosema plasmid를 주형으로 하여 N. ceranae-specific LAMP는 56.4°C에서 성공적으로 N. ceranae 특이 DNA를 신장하였으며,Nosema 특이 real-time PCR에 의하여 감염이 확인된 꿀벌 시료도 N. ceranae-specific LAMP에 의하여감염을 재 확인하였다.
N. ceranae-specific LAMP는 현장에서 유용하게사용될 수 있을 것으로 사료되며, N. ceranae에 의한자연적인 감염도 모니터링 할 수 있을 것으로 기대된다.

영어초록

Nosema disease (Nosemosis) in honeybees is caused by obligate intracellular parasites, Nosema apis (N. apis), and also by Nosema ceranae (N. ceranae). Recently, N. ceranae was often found not only in Apis cerana, but also in European honeybees, Apis mellifera. N. ceranae was known more pathogenic and virulent to Apis mellifera than N. apis. In this study, new LAMP method for the specific detection of N. ceranae in honeybee was developed (N. ceranae-specific LAMP). Four N. ceranae-specific primers named Nosema-F3/B3/FIP/BIP were designed based on N. ceranae small subunit ribosomal RNA gene (GenBank, DQ486027). After optimization of conditions, N. ceranae-specific amplification was successfully performed using N. ceranae-specific LAMP from standard N. ceranae-specific template under isothermal conditions at 56.4°C. Also, for the application to clinical samples, N. ceranae-infected honeybees from apiaries were tested. All positive samples that were verified by Nosemaspecific real-time PCR were detected using N. ceranae-specific LAMP. N. ceranae-specific LAMP may be expected to be useful for the specific detection of N. ceranae in field and for the monitoring of natural infection in Apis mellifera by N. ceranae.

참고자료

· 없음