식중독세균 5속의 동시 동정을 위한 ERIC-PCR 반응성분 농도의 최적화

서지정보

· 발행기관 : 한국식품위생안전성학회
· 수록지 정보 : 한국식품위생안전성학회지 / 18권 / 4호
· 저자명 : 서현아, 박성희, 김근성

초록

본 연구는 식품을 오염시켜 식중독을 유발하는 주요 식중독 세균인 Escherichia, Salmonella, Shigella, Vibrio, Listeria 등 5속의 병원성 세균들을 반복성 염기성열을 이용한 ERIC-PCR을 이용하여 동시에 동정할 때 이용되는 주요 PCR 반응성분인 MgCl_2, dNTPs, primer, template DNA의 최적 농도를 결정하였다. MgCl_2 반응성분은 2 mM을 적용하였을 때부터 일정한 fingerprinting pattern을 얻을 수 있었으므로 2 mM을 MgCl_2의 최적농도로 결정하였다. dNTPs의 농도는 250 μM까지 증가함에 따라서 6균주 모두 200 μM까지는 농도 증가와 비례하여 단편의 수와 강도가 점증하였으나 그 이상의 농도에서는 단편의 수와 강도가 일정하였다. 그러므로 일정한 fingerprinting pattern을 얻기 위하여 200 μM의 dNTPs만으로도 충분하였다. ERIC primer들은 2 μM의 농도를 적용했을 때부터 일정한 fingerprinting pattern을 나타낼 수 있었으며, 그 이상의 농도를 적용했을 때 단지 단편들의 강도만이 증가하였다. Template DNA도 다른 PCR 반응성분에 대한 실험과 마찬가지로 적용한 DNA양의 증가에 따라 단편의 강도가 증가하였다. 그러나 대부분의 적용 균주들에 대하여 DNA의 양이 최소일 때와 최대일 때 각각의 얻어진 fingerprinting pattern들을 비교할 때 단편의 수는 별 차이가 없었다.

영어초록

The five different foodborne pathogenic bacterial genera of Escherichia, Salmonella, Shigella, Vibrio and Listeria are important sources of foodpoison. However, the method was not developed to simultaneously differentiate these five bacteria at molecular leve l. The optimized concentrations of the four major PCR cocktail components of MgCl_2, dNTPs, primers and template DNA were determined when ERIC (entero bacterial repetitive intergenic consensus)-PCR reactions were carried out to differentiate the five different foodborne pathogenic bacteria. The optimized concentration of MgCl_2 was determined to be 2 mM in order to obtain a consistent fingerprinting pattern. The similar fingerprinting pattern was obtained when ERIC primers and dNTPs were added up to concentrations of 2 μM and 200 μM, respectively. As for template DNA, the numbers of PCR fragments were not affected, but their intensities were increased as the concentrations of the DNA were increased.

참고자료

· 없음