체외수정 유래 소 배반포로부터 유사 배아 줄기 세포의 확립 및 유지

서지정보

· 발행기관 : 한국동물번식학회
· 수록지 정보 : Reproductive & developmental biology / 31권 / 3호
· 저자명 : 이유연, 김선욱, 김지수, 송봉석, 조윤정, 박정선, 유대열, 진동일, 이경광, 구덕본

목차

ABSTRACT 요약 서론 재료 및 방법 체외성숙과 수정 생쥐 태아 섬유아 세포의 준비 부화 배반포와 생쥐 태아 섬유아 세포의 공배양 및 계대 배반포 유래 콜로니에서 내부 세포괴 분리 과정 및 지속적 배양 콜로니의 형태학적 관찰 RT-PCR을 이용한 배아 줄기 세포 특이 유전자의 발현 확인 면역 화학적 염색에 의한 콜로니 특성 분석 배아체로의 분화 유도 확립된 배아 줄기 세포의 성판별 결과 소 배반포 유래 유사 배아 줄기 세포주의 확립 유사 배아 줄기 세포의 특성 검증 유사 배아 줄시 세포에서 분화능 확인 고찰 인용문헌

초록

본 연구는 소 배반포의 내부 세포괴로부터 다능성(pluripotency)을 지닌 배아 줄기 세포(embryonic stem cell) 또는 그 유사 세포를 분리 및 배양함으로써 줄기 세포 관련 분야의 기반 기술을 확립하고자 하였다. 소 체외수정란을 10～12일간 체외배양하여 생산된 부화 배반포를 세포분열이 불활성화된 생쥐 태아 섬유아 세포(mouse embryonic fibroblast, MEF) 위에서 배양하여 콜로니 형성을 유도하였으며, 이들로부터 내부 세포괴 유래의 형태를 지닌 것만을 광학현미경 하에서 물리적으로 분리하여 약 5～7일 간격으로 계대배양을 실시하였다. 이러한 방법을 통하여 배아 줄기 유사 세포의 특성을 40계대 이상 유지하는 2개의 세포주를 확립하였다. 각각의 세포주들은 높은 alkaline phosphatase(AP) 활성을 지니고 있었으며, 형광 면역 염색법과 PCR 기법을 사용하여 Oct-4, Nanog, STAT3, SSEA3 및 SSEA4의 발현을 관찰할 수 있었다. 이러한 결과를 종합하여 볼 때 ,본 연구에서는 소 배반포로부터 배아 줄기 세포주를 확립하는 제반 기술이 확립되었다고 판단되며, 향후 관련 분야 연구에 활용될 수 있을 것으로 기대된다.

영어초록

This study was conducted to examine the establishment of bovine ES-like cells havi ng pluripotency. The hatched blastocysts derived from culture of in vitro fertilized embryos for 10 to 12 days dissociated mechanically into ICM- and trophectoderm-rich clumps using needle, and cultured onto mitotically-inactivated MEF feeder layer. The primary colonies originated from ICM cells were detached mechanically 7 days after seeding and subsequent subculture was conducted at intervals of every 5 to 7 days. Two ES -like cell lines were established and maintained over 40 passages. Self-renewal of the established lines was confirmed by examining the alkaline phosphatase activity, stem cell-specific marker profiles including SSEA isotopes, Oct-4 and STAT3. Moreover, the established cell lines could produce anchorage-independent embryoid bodies (EBs) with gradual decrease of Oct-4 transcript level in time-dependent manner.

참고자료

· 없음