돼지 B-Casein을 이용한 EGFP 발현 Knock-in 벡터의 구축 및 발현 검증

서지정보

· 발행기관 : 한국동물번식학회
· 수록지 정보 : Reproductive & developmental biology / 32권 / 3호
· 저자명 : 이상미, 김혜민, 문승주, 강만종

목차

ABSTRACT 요약 서론 재료 및 방법 결과 고찰 인용문헌

초록

본 연구는 돼지 B-casein 유전자 위치에서 EGFP가 발현될 수 있는 knock-in 벡터를 구축하기 위하여 실시되었다. 돼지의 B-casein 유전자를 이용하여 knock-in 벡터를 구축하기 위해 돼지의 태아 섬유아세포로부터 B-casein 유전자를 동정하였고 EGFP, SV4O polyA signal을 동정하였다. Knock-in 벡터는 5' 상동 영역 약 5 kb와 3' 상동 영역 약 2.7 kb로 구성되어있으며, positive selection marker로 neor 유전자를, negative selection marker로 DT-A 유전자를 사용하였다. 구축된 knock-in 벡터로부터 EGFP의 발현을 확인하기 위하여 생쥐 유선 세포인 HC11 세포에 knock-in 벡터를 도입하였다. 그 결과 EGFP의 발현을 HC11 세포에서 확인하였다. 이와 같은 결과로서 이 block-in 벡터는 knock-in 형질전환 돼지를 생산하는데 사용될 수 있을 것으로 생각된다.

영어초록

This study was carried out to develop knock-in vector for EGFP (enhanced green fluorescent protein) expression in porcine B-casein locus. For construction of knock-in vector using porcine B-casein gene, we cloned the B-casein genome DNA from porcine fetal fibroblast cells, EGFP and SV40 polyA signal using PCR. The knock-in vectors consisted of a 5-kb fragment as the 5' recombination arm and a 2.7-kb fragment as the 3' recombination arm. We used the neomycin resistance gene (neor) as a positive selectable marker and the diphtheria toxin A (DT-A) gene as a negative selectable marker. To demonstrate EGFP expression from knock-in vector, we are transfected knock-in vector that has EGFP gene in murine mammary epithelial cell line HC11 cells with pSV2 neo plasmid. The EGFP expression was detected in HC11 cells transfected knock-in vector. This result demonstrates that this knock-in vector may be used for the development of knock-in transgenic pig.

참고자료

· 없음