현대생물학실험1 1차 풀레 E. coli에서 Taq DNA polymerase의 발현 및 정제와 PCR을 이용한 확인(A0)

소개

"현대생물학실험1 1차 풀레 E. coli에서 Taq DNA polymerase의 발현 및 정제와 PCR을 이용한 확인(A0)"에 대한 내용입니다.

목차

1. Abstract
2. Introduction
3. Meterial & Method
4. Results
5. Discussion
6. Reference

본문내용

1. Abstract
본 실험은 pTTQ18 vector의 lac operon system을 통해 Taq DNA polymerase 과발현 시키고 정제한 뒤 PCR(Polymerase Chain Reaction)을 수행하고, gel electrophoresis를 통해 PCR product의 band를 확인하는 것에 그 목적이 있다. 과발현을 위해 inducer인 IPTG가 사용되었으며, 발현된 단백질 정제 전 세포를 파괴하여 세포 성분을 분출시키는 cell disruption으로 Enzymatic method, Detergent method을 사용했다. 이후 Heat Inactivation of other proteins과 ammonium sulfate을 통한 protein precipitation by salting out, protein dialysis를 수행하여 단백질을 정제하였다. 정제된 Taq DNA polymerase을 확인하기 위해 시중의 Taq DNA polymerase(PC), DIW(NC), 1배, 4배, 16배, 64배, 256배로 dilution 한 실험에서 만든 Taq DNA polymerase를 PCR로 증폭한 다음 agarose gel electrophoresis를 수행하였다. UV로 이를 조사하여 band를 확인하였는데, 16배와 4배로 희석한 Taq DNA polymerase와 PC에서 750 bp 위치에 band가 나와 실험값이 이론값을 잘 반영함을 확인할 수 있었다. 실험에서 16배와 4배를 제외한 다른 Sample에서는 band가 나타나지 않았는데, 이는 gel-loading 시에 slot에 너무 깊게 pipette tip을 넣어 생긴 구멍으로 sample이 샜기 때문이며, 이를 주의하기 위해 slot의 밑바닥에 tip이 닿지 않도록 해야 한다. 유의미하게 나타난 16배 희석 sample보다 PC에 의한 band의 밝기가 더 높아 실험에서 정제한 Taq DNA polymerase은 더 적은 희석 농도에서 시중의 Taq DNA polymerase의 농도와 비례함을 예상할 수 있다.

참고자료

· David L. Nelson(2023), 레닌저 생화학, 월드사이언스, 83~88p
· Geoffrey M. Cooper(2019), The cell, 월드사이언스, 137~138p
· Chan Wha Kim(1996), Salting-out Effects on the Partition of Proteins in Aqueous Two-phase Systems, 한국미생물생명공학회, 352-357p