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Taq DNA polymerase 발현, 정제 및 PCR 확인2025.12.191. Taq DNA polymerase 발현 및 정제 pTTQ18 vector의 lac operon system을 이용하여 E. coli에서 Taq DNA polymerase를 과발현시킨다. IPTG를 inducer로 사용하여 지속적인 발현을 유도하고, cell disruption(Enzymatic method, Detergent method)으로 세포를 파괴한다. Heat inactivation으로 다른 단백질을 제거하고, ammonium sulfate를 이용한 salting out과 protein dialysis를 통해 목표 단...2025.12.19
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Taq DNA Polymerase 발현 및 정제, PCR을 통한 확인2025.12.141. Taq DNA Polymerase 발현 및 정제 pTTQ18 vector를 사용하여 E.coli에서 Taq DNA polymerase를 lac operon으로 발현시켰다. Cell disruption 방법으로 enzymatic method와 detergent method를 사용하였고, Taq DNA polymerase는 Thermus aquaticus에서 유래하여 고온에서 안정하므로 75°C에서 1시간 incubation하여 다른 단백질과 분리하였다. Salting out으로 ammonium sulfate를 사용하여 단백질을 ...2025.12.14
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Taq DNA polymerase의 발현 및 정제, 확인2025.11.171. Taq DNA polymerase 발현 및 정제 Thermus aquaticus에서 분리한 Taq DNA polymerase는 높은 온도에서도 변성되지 않는 특성이 있어 PCR에 널리 사용된다. E.coli를 숙주세포로 사용하여 pTTQ18 vector에 삽입된 Taq DNA polymerase 유전자를 발현시킨다. IPTG를 첨가하여 lac operon을 활성화시켜 단백질을 과발현시킨다. 세포 파괴는 lysozyme을 이용한 효소적 방법과 계면활성제를 이용한 방법을 사용하며, 고온 처리로 다른 단백질을 변성시킨다. Ammon...2025.11.17
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E.coli 형질전환 실험보고서2025.01.041. 형질전환의 원리 형질전환은 외부로부터 주어진 DNA에 의하여 생물의 유전적인 성질이 변하는 현상을 말한다. 1928년 영국의 F. 그리피스가 폐렴쌍구균을 이용한 실험을 통해 발견되었다. 형질전환에 필요한 최소 DNA량은 약 10만분의 1 mol이며, double strand DNA가 single strand DNA보다 전환을 일으키기 쉽다. 형질전환 실험을 통해 유전자의 본체가 DNA라는 것이 밝혀졌다. 2. 형질전환의 메커니즘 Competent 세포는 적절한 크기의 DNA 단편과 결합할 수 있다. DNA 흡수에는 에너지가 소...2025.01.04
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박테리아 형질전환(Transformation) 실험2025.11.161. 형질전환(Transformation) 형질전환은 plasmid DNA를 E.coli에 도입하는 과정입니다. 42℃ heat shock을 통해 세포막의 유동성을 증가시켜 DNA가 통과할 수 있는 adhesion zone을 형성합니다. Heat shock 조건에서 세포 투과성이 증가되며, 이는 작은 DNA 분자가 세포 내로 진입할 수 있게 합니다. Electroporation은 전기장을 사용하는 대안적 방법입니다. 2. 회복 기간(Recovery Period) 회복 기간은 형질전환된 세포의 생존력과 클로닝 효율을 높입니다. 이 기...2025.11.16
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Plasmid DNA Purification 예비보고서2025.12.141. Plasmid DNA의 구조와 특성 Plasmid는 원핵생물인 세균에서 발견되는 작은 원형의 이중 가닥 DNA 분자로, 염색체 DNA와 독립적으로 존재하며 복제될 수 있습니다. 항생제 저항성 유전자나 특정 단백질을 발현할 수 있는 유전자를 포함하고 있어 유전자 클로닝, 형질전환, 단백질 발현 연구에 널리 활용됩니다. 복제 기작에 따라 high-copy plasmid(수백~수천 개 복제)와 low-copy plasmid(제한적 복제)로 나뉩니다. 2. Alkaline Lysis Mini-prep 방법 가장 일반적으로 사용되는 p...2025.12.14
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세균의 형질전환 / bacterial transformation2025.01.121. 유전자 재조합 유전자 재조합은 서로 다른 genome에서 얻은 유전자를 한 세포로 몰아서 돌연변이 없이 새로운 유전형질을 가진 cell을 만드는 과정이다. 유전자 재조합 방법에는 transformation, transduction, conjugation이 있다. Transformation, 즉 형질전환은 세포에 외부 유전자를 인공적으로 도입시켜 숙주세포에 넣어서 세포가 원래의 특성이 아닌 다른 유전형질을 갖도록 하는 것이다. 2. 박테리아의 DNA 흡수 이유 박테리아가 외부 DNA를 흡수하는 이유는 유성생식을 하는 유기체와 다...2025.01.12
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미생물 배양 배지 제조 및 E.coli 접종 실험 보고서2025.05.071. 미생물 배양 배지 제조 실험에서는 미생물 배양에 기본이 되는 LB 배지를 제조하는 과정을 설명하고 있습니다. LB 배지는 tryptone, yeast extract, NaCl, agar로 구성되며, tryptone은 아미노산과 펩타이드를 공급하고, yeast extract는 질소, 당, 무기/유기물을 제공하며, NaCl은 세포 내 이온 신호전달과 삼투압 조절에 필요합니다. Agar는 고체 배지를 만드는 데 사용됩니다. 또한 R2A 배지, YM 배지, NB 배지, TBS 배지 등 다양한 종류의 배지와 그 특성에 대해서도 설명하고...2025.05.07
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형질전환과 블루-화이트 스크리닝 실험2025.11.171. 형질전환(Transformation) 형질전환은 외부의 DNA 또는 플라스미드가 세포에 도입되어 새로운 유전형질을 획득하는 현상입니다. 자연계에서는 세균 성장 곡선의 정체기에 주로 발생하지만, 실험실에서는 화학적 또는 물리적 처리를 통해 수용능 있는 세포(competent cell)를 만들어 효율적으로 형질전환을 수행합니다. 본 실험에서는 CaCl2 처리를 통해 TOP10 E.coli competent cell을 준비하고, heat shock 방식으로 플라스미드 DNA를 세포 내로 도입했습니다. 2. 블루-화이트 스크리닝(Bl...2025.11.17
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Plasmid DNA 정제2025.01.131. 대장균(E. coli) 대장균(E.coli)은 Theodor Esherich의 이름을 따서 발견되어 명명된 박테리아이다. 특징으로는 그람음성의 간균이며, 포자 생성을 하지 않으며, 1-2 microns x 30-30 micron (1 micron = 0.001 mm)크기이고, 섭씨 37도에서 쉽게 자랄 수 있다. 2. Plasmid DNA Plasmid DNA란 세균 속에 주 DNA와 별도로 존재하면서 증식할 수 있는 고리 형태의 DNA로, 원핵생물과 효모 등에서 발견된다. 대장균 세포에서 분리된 Plasmid DNA는 sup...2025.01.13
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