[화공생물공학단위조작실험1 A+] 단백질정량법비교(BCA,Bradford) 예비 레포트

소개

"[화공생물공학단위조작실험1 A+] 단백질정량법비교(BCA,Bradford) 예비 레포트"에 대한 내용입니다.

목차

1. 실험 목표

2. 실험 원리
1) 단백질 정량법
2) 흡광도 측정

3. 시약 & 실험 기구 및 방법

4. 실험 시 주의사항

5. 참고 문헌

본문내용

1. 실험 목표
Bicinchoninic Acid(BCA)와 Bradford를 이용한 단백질 정량법을 이용하여 미지시료의 단백질 농도를 측정하고 두 방법의 결과를 비교 분석한다. 또한 미지시료를 분석함에 있어 어떤방식이 적절한지 판단한다.

2. 실험 원리
2-1. 단백질 정량법
단백질 정량법은 전체 단백질을 정량하는 방법과 특정 단백질을 정량하는 방법 크게 두 가
지로 나뉜다. 본 실험에서는 전체 단백질을 정량하는 방법인 BCA와 Bradford를 사용하므로, 전체 단백질을 정량하는 방법들을 알아보고자 한다.

<중 략>

2) Bradford Assay
• 원리
염색약인 Coomassie brilliant blue dye가 단백질과 결합하면 최대 흡광 파장이 465nm에서 595nm로 바뀌게 된다. 이 성질을 이용하여 595nm에서의 흡광량이 단백질의 농도를 나타낸다. Coomassie blue G250, phosphoric acid, methanol의 혼합물로 시판되는 Bradford solution이 assay 법에서 요구되는 유일한 reagent이며, 단백질과 Bradford solution의 반응은 2분 안에 완결되고, 발색 정도는 1시간까지 안정하게 유지된다.
• 장점
- 방법이 간단하다.
- 반응이 신속하게 진행된다.
- 감도가 높아서 1μg까지도 정량이 가능하다.
- 환원제와 EDTA의 영향을 거의 받지 않는다.
• 단점
- SDS 또는 다른 계면활성제의 영향을 받기 쉽다.
- 반응액이 산성이기 때문에 지질을 대량으로 함유하는 sample에서는 침전을 생성하는 경
우가 있다.
- 희석하면 농도가 떨어져 재실험 시 어려움이 있다.
- 사용한 단백질은 비가역적으로 변성된다

참고자료

· 화공생물공학과 교수진, “화공생물공학단위조작실험1”, 동국대학교 화공생물공학과, 2024, pp.38-45
· Noble JE and Bailey MJ, Quantitation of protein. Methods Enzymol. 463:73-95, 2009.
· Bradford MM. A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding. Anal Biochem. 72:248-254, 1976.
· Lowry OH et al. Protein measurement with the Folin phenol reagent. J Biol Chem. 193:265-275, 1951.
· Smith PK et al. Measurement of protein using bicinochoninic acid. Anal Biochem. 150:76-85, 1985.