생화학실험레포트_SDS-PAGE

목차

Ⅰ. Title

Ⅱ. Date

Ⅲ. Key-word

Ⅳ. Theory
1. SDS (sodium dodecyl sulfate)
2. polyacrylamide gel
3. Laemmli sample buffer
4. SDS-PAGE running buffer
5. polyacrylamide gel에서 단백질 검출 방법 (Coomassie blue staining, silver staining)

Ⅴ. Regent & Apparatus

Ⅵ. Procedure

Ⅶ. Observation

Ⅷ. Result

Ⅸ. Discussion
1. 영동 과정 및 원리 설명
2. SDS-PAGE 결과 분석

본문내용

1. SDS (sodium dodecyl sulfate)
CH3(CH2)11SO4Na의 화학식을 가진 SDS (Sodium Dodecyl sulfate)는 세척제와 위생 용품 등에 널리 사용되는 유기황 산염 화합물 중 하나이다. SDS는 양친매성을 띠는데, 12개의 탄소 사슬을 가진 hydrophobic tail(소수성 꼬리)와 hydrophilic head(친수성 머리)를 가진 구조적 특징 때문인데 이러한 특징으로 인하여 단백질과 결합할 때에 단백질 변성을 유발한다. 그러므로 SDS는 세포막에 포함된 단백질처럼 일반적인 완충용액에서 잘 용해되지 않는 단백질을 분 리 및 분석하는 데 유용하게 사용된다. 또, SDS는 RNA 및 DNA 추출과정에서 세포 용균(lysis)으로 사용되어 세포를 부수는 역할을 한다. 특히 SDS-PAGE에서는 단백질의 비공유 결합을 파괴하여 단백질이 본래의 구조와 형태를 잃게 만드는데 이 과정에서 모든 단백질은 동일한 질량 당 전하 비율을 가지게 되어 전하와 관계없이 단백질의 크기만을 기 준으로 분리할 수 있게 되는 것이다.
2. polyacrylamide gel
Acrylamide와 cross-linking agent(가교제)인 N,N’-methylene-bis-acrylamide가 자외선과 같은 중합화 인자의 존재 하에 중합되면 가교 acrylamide가 형성된다. acrylamide를 물에 녹이고 중합을 거치면 수용성 polyacrylamide가 생 성되며, 여기에 적당량의 N,N′-methylene-bis-acrylamide나 유사한 가교제를 첨가하면 무색의 투명하고 탄력 있는 gel을 얻을 수 있는데 이 gel이 polyacrylamide gel이다. 중합 반응은 자유 라디칼 부가 반응이고, 일반적으로 Ammonium persulfate와 N,N,N′,N′-tetramethylethylenediamine (TEMED)을 중합 촉진제로 사용한다.

참고자료

· 부성희, 생화학 실험, 제2판, 2019, 청문각, p.115~p.122
· Michael Ash, Irene Ash, Handbook of Preservatives (2004), Synapse Info Resources.
· Turro, N.J.; Yekta, A. (1978) Luminescent probes for detergent solutions. A simple procedure for determination of the mean aggregation number of micelles. J. Am. Chem. Soc. 100: 5951–5952. doi: 10.1021/ja00486a062.
· Bales, Barney L.; Messina, Luis; Vidal, Arwen; Peric, Miroslav & Nascimento, Otaciro Rangel. (1998) Precision Relative Aggregation Number Determinations of SDS Micelles Using a Spin Probe. A Model of Micelle Surface Hydration. J. Phys. Chem. B. 102 (50): 10347–10358. doi: 10.1021/jp983364a.
· Gloxhuber, C., & Kunster, K., Anionic Surfactants: Biochemistry, toxicology, dermatology (2nd edition, 1992), CRC Press.