생화학 실험/실습 보고서 (박테리아에서의 DNA 분리)

소개

"생화학 실험/실습 보고서 (박테리아에서의 DNA 분리)"에 대한 내용입니다.

목차

[1] 실험 목적
[2] 이론
[3] 실험 시약 및 기구
[4] 실험 방법
[5] 실험 결과
[7] 참고문헌

본문내용

[1] 실험 목적
Plasmid DNA 분리법을 사용하여 박테리아 DNA를 분리하는 과정을 이해한다.
[4] 실험 방법
1. ampicillin이 포함된 LB배지에 colony 1개를 따서 넣고, shaking incubator(37°C)에서 12~16시간동안 배양했다. (LB 배지 5mL+ampicillin 5μL)
2. cell이 자란 LB배지를 e-tube에 1mL 옮기고 4°C/13,000rpm에서 1분간 원심분리한다. 상층액은 버리고 침전물만 남겼다. (4번 반복)
3. sol I 100μL를 넣고 pellet을 resuspend했다. (pipette으로 up&down)
4. sol II 200μL를 넣고 조심스럽게 inversion했다. (tube를 위아래로 뒤집는다)
5. sol III 150μL를 넣고 inversion한 뒤 ice에 잠시 넣어두었다.
6. tube를 4°C/13,000rpm에서 5분간 원심분리했다.
7. 상층액을 새 tube에 옮겼다.
8. Phenol : Chloroform : Isoamylalcohol(25 : 24 : 1)500μL를 넣은 후 세게 흔들었다.
9. 4°C/13,000rpm에서 5분간 원심분리했다.
10. 상층액을 새 tube에 옮기고 100% 에탄올을 tube 거의 끝까지 차도록 채워 넣고 -80°C deep freezer에 30분간 넣어두었다. (deepfreezer는 1층에 있음)
11. 4°C/13,000rpm에서 30분간 원심분리했다.
12. 100% 에탄올을 따라 버리고 1분동안 다시 원심분리했다. 원심분리 후 남은 에탄올을 피펫으로 조심스럽게 최대한 제거했다. (pellet은 건드리지 않도록 주의)
13. 70% 에탄올을 100μL 가하고 inversion한 후 1분간 원심분리했다.
14. 에탄올을 전부 제거하고 pellet이 투명해질때까지 기다렸다.
15. 10μL의 DDW로 마른 pellet을 resuspend하여 -20°C에 보관했다.
*pellet의 양이 많아서 다른 조와 다르게 DDW를 10μL 넣었다.

참고자료

· 네이버 지식백과 생명과학대사전, shaking incubator
· Sigma-Aldrich, “phenol:chloroform:isoamyl alcohol 25:24:1”, https://www.sigmaaldrich.com/KR/ko/product/sigma/77617, 2024.05.28