생화학 실험/실습 보고서 (박테리아의 형질전환)

소개

"생화학 실험/실습 보고서 (박테리아의 형질전환)"에 대한 내용입니다.

목차

[1] 실험 목적
[2] 이론
[3] 실험 시약 및 기구
[4] 실험 방법
[5] 실험 결과
[6] 고찰
[7] 참고문헌

본문내용

[1] 실험 목적
클로닝에 대해 이해하고, 박테리아의 유전형질을 형질전환 시켜 형질전환효율을 구한다.

[4] 실험 방법
1. -80°C(deep freezer)에 보관되어있는 competent cell을 받아 ice에서 1/3정도 녹였다.
2. e-tube에 competent cell 30μL와 외래 DNA(pUC19)를 3μL를 넣고 30분간 얼음에 넣어두었다.
3. 2의 e-tube를 42°C에서 30초간 heat shock 후 얼음에 살짝 식혔다.
4. 얼음에 tube를 넣은 후 100μl의 LB 배지를 넣었다.
→ 내용물이 섞이도록 pipet으로 up &down해주었다.
5. 위의 e-tube 상태로 오븐에 넣고(37°C) 40분동안 incubation했다.
6. 원액으로 10배 희석한 희석액을 만들었다. (원액 10μL + DDW 90μL)
7. 원액과 10배 희석액을 각각 75μL씩 취해 LB plate(ampicillin 함유 고체배지)에 도말했다.
8. 37°C에서 12시간 이상(보통 16~18시간) 배양했다. (목요일 12~17시 사이에 실습실에서 확인했다)
9. 배지에 자란 colony의 수를 세고 형질전환 효율을 구했다

*도말하는 방법
1. 세균을 증균시킨 증균액을 소량 취하여 배지 위에 균액을 분주한다.
2. 도말봉을 아래 위로 움직이며 균액을 넓게 펴준다. 이때 너무 세게 하면 배지가 찢어질 수 있으므로 조심한다. 도말봉을 문지를 때 느낌이 매끈하다가 거친 느낌이 나기 시작하면 균액이 모두 흡수된 것이다.
→ 도말봉 사용 전후에는 95% 에탄올에 담근 도말봉을 알콜 램프를 이용해 화염 멸균한 후 반드시 식혀서 사용한다.

<주의사항>
- competent cell, 외래 DNA 그리고 희석한 균액이 뜰 때에는 성분이 가라앉을 수 있으므로 윗부분에서만 뜨지 말고, 살살 흔들어 충분히 섞이게 한 뒤 아래쪽에서 뜨도록 한다.
- 배지 부분이 위로 오도록 놓아야한다. 뒤집으면 수증기가 배지에 떨어져 오염될 수 있다.

참고자료

· 네이버 지식백과 미생물백과, 클로닝
· 네이버 지식백과 분자ㆍ세포생물학백과, 형질전환