[충남대] 생물학실험 - 대장균 배양과 형질전환, plasmid DNA 분리

소개

충남대 생물학실험 보고서입니다! (A+)

목차

I. 서론
II. 재료 및 방법
III. 결과
IV. 논의
V. 참고문헌
VI. NOTE

본문내용

세포배양은 세포생장에 필요한 생체내의 조건을 체외에서 인공적으로 제공하여 세포를 대량 증식시키기 위해 흔히 사용되는 기술이다(김태전 외2인, 2004). 배양을 할 때에는 그 목적에 따라 어느 세포주를 대상으로 할 수도 있고 어떤 기관을 대상으로 할 수도 있다(김태전 외2인, 2004). 단일의 세포를 배양하여 콜로니를 형성하는 단세포배양이나, 역으로 대량의 세포를 배양하는 대량배양이 있다(강영희, 2008). 배양방법에는 도말배양법, 획선배양법 등이 있다. 도말배양법은 평판배지의 표면에 균 또는 균을 함유한 시료를 도말하여 콜로니를 형성하게 하는 방법을 말한다. 획선배양(streak culture)은 고체배지의 표면에 선을 긋듯이 균을 접종하여 시행하는 배양법이다(강영희, 2008). 세포배양을 위하여 실험장소는 무균적이어야한다(박승택, 2002). 공기여과장치가 있는 무균대 또는 무균벤치(laminar flow hood)가 있으면 무균실로서 충분하다(박승택, 2002).
배지란 균이나 세포 배양에 사용하는 용액(액체배양) 또는 한천 등으로 고정시키는 고체이다(강영희, 2008). 생물의 생존이나 증식을 유지하기 위해 염류, 탄소원, 질소원 등이 포함되어 있기도 한다(강영희, 2008). 또 세포에 적합한 삼투압과 pH를 유지하기 위해 완충액을 포함하기도 한다(강영희, 2008). 본 실험에서 사용한 배지는 고체 LB 배지이다. LB 배지(Luria-Bertani broth)는 박테리아 성장에 주로 사용된다. 효모로부터 추출되어 미생물이 생장하는데에 필요한 여러가지 영양물질이 함유된 효모 추출물, 우유단백질인 카세인을 분해하여 단백질 공급원이 되는 Tryptone, 배양할 세포가 삼투에 의하여 터지지 않도록 해주는 염화 나트륨을 첨가하여 만든다. 액체배지, 고체배지로 모두 가능하며 고체배지로 만들경우 한천(agar)을 첨가하여 만든다. LB 배지 조성에 추가로 Ampicillin이라는 항생제를 첨가하여 LA 배지를 만든다. 이는 형질전환(Transformation) 실험 시 원하는 Plasmid가 삽입된 세포를 선별하는데 사용될 수 있다.

참고자료

· 강영희. 2008. 생명과학대사전. 초판. 아카데미서적. p.593, pp.808-809, p.1720, p.1864.
· 김태전 외2인. 2004. 세포배양학 개론. 초판. 고려의학. pp.199-201.
· 남상욱 외2인. 2020. 유전공학의 이해. 제3판. ㈜라이프사이언스. pp.40-41, pp.66-69, pp.98-104.
· 박승택. 2002. 세포배양의 이해. 초판. 박문각. p.99.
· 안웅식·노민석. 2005. 알기 쉬운 유전자 공학. 고려의학. p.20.
· 네이버 지식백과
· https://terms.naver.com/entry.naver?docId=297868&cid=60262&categoryId=60262 (도말배양의 정의)
· 위키백과
· https://ko.wikipedia.org/wiki/Lb%EB%B0%B0%EC%A7%80 (LB 배지의 정의 및 대장균의 형질전환 원리)