4주차_minipreparation

소개

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목차

1. 실험목적
2. 실험 결과
3. Discussion
4. Further study
5. Reference

본문내용

① Miniprep
② 실험 목적
e.coli에 transformation한 plasmid를 minipreparation 방법을 통해 transformed plasmid DNA를 분리하고 DNA를 정량하여 결과를 확인한다.
③ 실험 결과
-DNA 농도: 0.2322 µg/µl
④ Discussion
-각 solution의 function은 다음과 같다.
Solution Ⅰ Glucose는 osmotic pressure를 유지해 세포가 터지지 않도록 한다. Tris-Cl은 buffer로서 pH를 안정적으로 유지하는 역할을 한다. DNA는 pH에 민감하기 때문에, Tris-Cl이 안정적인 pH를 유지함으로써 DNA가 손상되지 않도록 한다. EDTA는 Ca, Mg와 같은 2가 양이온과 결합하는 chelating reagent이다.

참고자료

· Jeremy M. Berg, John L. Tymoczko, Gregory J. Gatto Jr., Lubert Stryer (2015). Biochemistry. W. H. Freeman. p72-73, p116
· Joe Sambrook (2001). Molecular Cloning_ A Laboratory Manual-Cold Spring Harbor Laboratory Press, pg 1.32-1.34 (chapter1/protocol 1)
· Bitesize Bio | How Alkaline lysis works | https://bitesizebio.com/180/the-basics-how-alkaline-lysis-works/
· QIAGEN | Key Steps in Plasmid Purification Protocols | https://www.qiagen.com/us/knowledge-and-support/knowledge-hub/technology-and-research/plasmid-resource-center/key-steps-in-plasmid-purification-protocols
· https://toptipbio.com/the-nanodrop-results-explained/
· http://www.afrontier.net/laboratory/product/item2.php?it_id=1586324500
· https://www.zymoresearch.com/blogs/blog/how-to-increase-plasmid-yield