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대장균에서 재조합 단백질 생산 및 정제2025.01.131. 재조합 단백질 생산 대장균 BL21(DE3) 균주는 재조합 단백질 고발현에 널리 사용되며, lac 프로모터와 T7 프로모터를 이용하여 IPTG 유도 하에 단백질을 발현할 수 있다. 본 실험에서는 pET28a 벡터를 사용하여 His-tag 융합 단백질을 생산하고, Ni-NTA 친화성 크로마토그래피와 FPLC를 통해 단백질을 정제하는 방법을 익혔다. 2. 단백질 분석 SDS-PAGE를 통해 단백질 크기별 분리와 정제 과정을 확인하였고, Bradford assay로 단백질 농도를 정량하였다. 또한 DES와 OASS 효소 활성 측정을...2025.01.13
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생명과학실험1 SDS-PAGE & Coomassie blue Staining2025.01.131. SDS의 역할 및 원리 SDS(sodium dodecyl sulfate)는 계면활성제의 일종으로 단백질이나 핵산의 구조를 깨뜨려 선형으로 만들어주는 역할을 한다. 아미노산의 소수성 부분과 hydrophobic interaction을 하며 결합하는데, 아미노산 2개당 1개 정도 binding하여 단백질을 변성한다. 2. Gel에 들어가는 시료의 역할 ① Tris-HCl: Stacking gel과 Resolving gel의 pH를 다르게 하여 각 gel에서 Glycine의 charge 다르게 조정해준다. 또한 Cl-를 첨가해주어서...2025.01.13
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연세대학교 생화학실험(1) 6주차 Peptide Mass Fingerprinting In-gel Digestion2025.05.041. Peptide Mass Fingerprinting (PMF) Peptide Mass Fingerprinting (PMF)은 단백질 동정을 위한 기술로, 단백질을 효소로 절단하여 생성된 펩타이드의 질량을 측정하고 데이터베이스와 비교하여 단백질을 식별하는 방법입니다. 이 기술은 SDS-PAGE를 통해 분리된 단백질 밴드에서 시작되며, 밴드를 절단하고 효소로 소화하여 생성된 펩타이드의 질량을 질량분석기로 측정합니다. 이렇게 얻은 펩타이드 질량 데이터를 데이터베이스와 비교하여 단백질을 동정하게 됩니다. 2. In-gel Digesti...2025.05.04
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크로마토그래피 분리 결과 보고서2025.04.261. 크로마토그래피 크로마토그래피는 물질 분리 기술로, 이동상과 고정상의 상호작용을 이용하여 혼합물을 분리한다. 본 실험에서는 크로마토그래피의 원리를 이해하고 분석 방법을 익히며, 관의 입자 간, 입자 내 공극률을 계산하여 원리를 이해하였다. Column chromatography를 이용하여 두 물질의 혼합물을 분리하고 흡착등온인자, 공극률, 용질 이동 이론을 이용하여 선택도를 계산하였다. 또한 용질의 물질전달 과정에서 무용 부피의 영향을 이해하였다. 2. 아미노산 분리 아미노산은 분자량과 구조가 유사하기 때문에 이들의 분리가 매우...2025.04.26
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LDH assay2025.01.231. 단백질 정제 실험 주제에서 다루고 있는 LDH assay는 단백질 정제 과정에 대한 내용을 포함하고 있습니다. 단백질 정제는 다양한 종류의 단백질이 섞여 있는 샘플에서 원하는 단백질을 분리하는 작업입니다. 크로마토그래피, SDS-PAGE, Western blot 등의 방법을 통해 단백질의 순도를 점차 높여나가는 과정이 설명되어 있습니다. 2. 효소 활성 측정 이 실험에서는 LDH(Lactate Dehydrogenase)라는 효소의 활성을 측정하는 방법에 대해 설명하고 있습니다. 효소 활성은 반응 속도, 특정 활성, 수율 등으로...2025.01.23
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밀도 이용 RNA 추출 실험 보고서2025.05.141. RNA 추출 이 보고서는 RNA 추출 실험에 대해 설명합니다. RNA는 DNA와 달리 일부 정보만을 활용하는 유전 물질로, 단백질 합성에 중요한 역할을 합니다. 실험에서는 Trizol, Chloroform, Isopropanol 등의 시약을 사용하여 RNA를 추출하고 정제하는 과정을 자세히 설명하고 있습니다. 또한 RNA 추출 과정에서 사용되는 시약들의 특성과 작용 원리, RNA 안정성 유지를 위한 DEPC 처리 등에 대해서도 자세히 다루고 있습니다. 2. RNA 구조와 종류 보고서에서는 RNA의 다양한 종류와 구조에 대해 설...2025.05.14
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A+ 생화학실험 <3주차. Agarose Gel Electrophoresis> 레포트2025.01.201. 겔 전기영동 겔 전기영동은 분자의 크기나 전하에 따라 DNA, RNA, 단백질을 비롯한 생물학적 분자들을 분리하는 실험방법 중 하나입니다. 전기영동의 원리는 gel matrix (주로 agarose 혹은 polyacrylamide) 내에 시료를 넣고, 양극과 음극으로 전기장을 가하면 분자들이 전하의 성질에 따라 이동하게 되는 것입니다. 분자의 크기 및 전하밀도에 따라 이동 속도에 차이가 발생하기 때문에, 서로 다른 크기 혹은 전하를 가진 분자들을 분리할 수 있습니다. 겔 전기영동에서 분자의 이동속도에 영향을 미치는 요인에는 입...2025.01.20
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전기영동 예비보고서2025.01.121. 전기영동 전기영동은 생체 고분자들을 분석, 분리하는 방법 중 하나입니다. 전기영동은 DNA, RNA나 단백질 등이 전하를 띄고 있고 이들이 전기장에 놓이게 된다면 이동성을 가진다는 것을 기본으로 합니다. 전기영동의 종류에는 띠 전기영동, 등속 전기영동, 등전점 전기영동, 2D 전기영동이 있습니다. DNA 이동에 영향을 주는 요인으로는 DNA 크기에 따른 Gel의 농도, DNA 분자의 크기, 전압, DNA의 형태 등이 있습니다. TAE buffer는 Tris, Acetate, EDTA로 구성되어 있으며 DNA를 끌어주는 역할을 ...2025.01.12
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대장균에서 재조합 단백질의 생산과 Western blot에 관한 실험2025.01.131. IPTG IPTG는 대장균 lactose operon의 효소합성을 유도하는 강력한 유도물질이다. 보통 유도물질은 operon의 활동에 의해 만들어지는 β-D-galactosidase에 의해 대사 이용하는 것이 많지만, IPTG는 분해되지 않아 비대사성 유도물질이라고도 불린다. 또한, 고농도로 사용시 galactoside permease가 없는 세포에도 투과할 수 있기 때문에 permease가 없는 균주에서의 유도실험에도 사용된다. 2. Buffer condition Tank buffer에는 glycine과 Cl-(Tris-ba...2025.01.13
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종이크로마토그래피2025.04.261. 크로마토그래피 크로마토그래피는 혼합물을 흡착제에 대한 친화도의 차이를 이용하여 분리, 정제, 정성, 및 정량분석을 할 수 있는 방법입니다. 크로마토그래피는 이동상과 고정상으로 이루어져 있으며, 물질에 따라 고정상에 흡착되는 속도가 다르기 때문에 혼합물이 분리됩니다. 크로마토그래피는 기체, 액체, 초임계 유체 크로마토그래피로 나뉘며, 고정상의 상태에 따라 컬럼법과 판법으로 세분됩니다. 2. 종이 크로마토그래피 종이 크로마토그래피에서는 여과지 표면에 흡착되어 있는 물이 고정상이 되고, 전개액으로 사용되는 유기용매가 이동상이 됩니다...2025.04.26
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