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[생화학실험]단백질 분리정제 및 기능분석 - buffer 만들기2025.05.051. 단백질 분리정제 및 기능분석 이 실험에서는 단백질 분리정제 및 기능분석을 위한 준비 과정으로 buffer를 제조하는 방법을 다룹니다. Buffer는 pH 변화에 영향을 받지 않는 용액으로, 생체반응에서 생성되는 산과 염기를 흡수할 수 있습니다. 실험에서는 1M Tris-HCl (pH 7.4), NaCl, MgSO4 stock solution을 제조하고, 이를 이용해 다양한 NaCl 농도의 elution buffer를 만드는 과정을 설명합니다. 또한 pH 미터기 사용법과 주의사항, 그리고 alkaline phosphatase 정...2025.05.05
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화공생물공학 단위조작실험1 단백질 정량법 비교2025.01.151. BCA Assay BCA Assay는 단백질이 구리 이온(Cu2+)을 1가 양이온(Cu1+)으로 환원시킬 수 있는 성질을 이용한 단백질 정량법입니다. 환원된 구리 이온은 Bicinchoninic Acid(BCA) 분자 2개와 반응하여 보랏빛의 착물을 형성하게 되며, 이 화합물의 흡광도 측정을 통해 단백질 농도를 정량할 수 있습니다. BCA Assay는 일반적인 버퍼 물질에 간섭을 덜 받고, 높은 온도에서 민감하고 빠른 반응을 할 수 있으며, 계면활성제와 함께 사용할 수 있다는 장점이 있습니다. 하지만 실온에서 반응이 완전히 수...2025.01.15
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연세대학교 생화학실험(1) 6주차 Peptide Mass Fingerprinting In-gel Digestion2025.05.041. Peptide Mass Fingerprinting (PMF) Peptide Mass Fingerprinting (PMF)은 단백질 동정을 위한 기술로, 단백질을 효소로 절단하여 생성된 펩타이드의 질량을 측정하고 데이터베이스와 비교하여 단백질을 식별하는 방법입니다. 이 기술은 SDS-PAGE를 통해 분리된 단백질 밴드에서 시작되며, 밴드를 절단하고 효소로 소화하여 생성된 펩타이드의 질량을 질량분석기로 측정합니다. 이렇게 얻은 펩타이드 질량 데이터를 데이터베이스와 비교하여 단백질을 동정하게 됩니다. 2. In-gel Digesti...2025.05.04
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미지 시료의 단백질 정량 - Kjeldahl method 활용2025.05.101. 단백질 정량 본 실험에서는 Kjeldahl method를 사용하여 미지의 시료(Rat 사료, 2g)에 함유된 질소를 정량하고, 이를 단백질량으로 환산하여 시료 중의 단백질량을 알아내었다. 실험 결과 시료의 조단백질 함량은 18.82%로 나타났다. Kjeldahl 기구의 각 부위에서 일어나는 화학적 반응(분해, 증류, 중화, 적정)도 고찰하였다. 2. 단백질 정량법 단백질 정량법에는 세미마이크로킬달법, 홀몰적정법, 반스라이크법 등이 있으며, 본 실험에서는 semi-micro kjeldahl 법을 사용하였다. 이 방법은 시료 내 ...2025.05.10
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일반생물학실험 <단백질 검출> 예비레포트2025.01.271. 단백질 단백질은 아미노산의 펩타이드 결합으로 생긴 종합체로, 세포 내외부의 다양한 기능을 수행합니다. 단백질의 구조는 1차, 2차, 3차, 4차 구조로 이루어져 있으며, 이러한 구조에 따라 단백질의 기능이 결정됩니다. 단백질은 세포 내외부의 지지, 운동 조절, 신호 전달, 물질 수송 등의 역할을 합니다. 2. 아미노산 아미노산은 단백질의 기본 구성단위로, 카복실기와 아미노기를 포함한 분자입니다. 총 20종류의 서로 다른 아미노산이 존재하며, 이들이 펩타이드 결합을 통해 연결되어 단백질을 형성합니다. 3. 펩타이드 결합 펩타이드...2025.01.27
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단백질의 분리2025.01.231. 단백질 분리 실험을 통해 원심분리를 이용하여 세포 내 단백질을 분리하는 방법을 익혔다. 단백질 분리를 위해 세포를 깨고 RIPA 버퍼에 녹인 후 원심분리하여 상층액을 얻었다. 이 상층액에는 세포에서 추출된 단백질이 포함되어 있다. 2. SDS-PAGE SDS-PAGE는 단백질의 크기에 따라 분리하는 기법으로, 단백질이 SDS에 의해 변성되어 전하/분자량 비율이 동일해지면 전기장 내에서 크기에 따라 이동속도가 달라져 분리된다. 이를 통해 단백질의 분자량을 확인할 수 있다. 3. 세포 용해 세포를 깨는 방법에는 homogeniza...2025.01.23
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생화학 크로마토그래피 발표A+ 받은 자료2025.05.071. 크로마토그래피 크로마토그래피란 정지상과 이동상을 사용해 시료들이 섞여 있는 혼합액을 이동속도 차이를 이용하여 분리하는 방법입니다. 크로마토그래피는 이동상과 고정상에 따라 기체-고체, 기체-액체, 액체-액체, 액체-고체 등으로 분류할 수 있습니다. 기체크로마토그래피는 기화가 가능한 시료를 사용하고 액체크로마토그래피는 용해성이 있는 시료를 사용합니다. 크로마토그래피의 특징은 여러 가지 용매로 실험을 해볼 수 있고 정확한 분리가 가능하며, 간단하고 빠르게 수행할 수 있다는 장점이 있습니다. 2. 기체크로마토그래피 기체크로마토그래피는...2025.05.07
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Gel 제조 (SDS-PAGE 실험을 위한 사전 준비) 보고서2025.01.131. 전기영동 전기영동은 DNA와 단백질과 같은 생체 고분자들을 분리 및 정제하는 방법입니다. 전기영동 원리는 음전하를 띄고 있는 생체고분자(DNA/단백질)들에게 전기적 힘(-음전하 ->＋양전하)을 가해주어, 물질이 사이즈에 따라 분리되는 것입니다. DNA 전기영동과 단백질 전기영동(SDS-PAGE)의 차이는 DNA는 음전하를 띄고 있어 Agarose(한천) Gel에서 관찰할 수 있지만, 단백질은 양, 음전하를 갖고 있어 SDS-sample buffer와의 혼합이 필요하며 Poly Acrylamide gel에서 관찰할 수 있습니다....2025.01.13
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[만점 레포트] 연세대학교 생화학실험(1) 3주차 아미노산의 분리 및 정성분석2025.05.041. 아미노산의 분리 및 정성분석 이 실험에서는 Ninhydrin 반응을 이용하여 아미노산, 펩타이드, 단백질의 발색 특성을 관찰하고, 종이 크로마토그래피와 전기영동을 통해 아미노산을 분리 및 정성 분석하는 방법을 익히는 것이 목적입니다. 실험 결과를 통해 Ninhydrin 반응의 원리, 아미노산의 분리 및 정성 분석 방법, 펩타이드의 전기이동도 차이 등을 이해할 수 있습니다. 2. Ninhydrin 반응 Ninhydrin은 아미노산, 펩타이드, 단백질과 반응하여 특유의 발색 반응을 일으킵니다. 이 반응은 pH 4~8, 100°C ...2025.05.04
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SDS-PAGE2025.01.121. SDS-PAGE SDS-PAGE는 단백질을 분리하는 기술로, 전기영동 이동성을 이용한다. 단백질은 SDS 처리를 통해 균일하게 음전하를 띠게 되어 분자량에 따라 분리될 수 있다. 이 실험에서는 단백질 발현에 IPTG의 영향을 확인하고자 하였으나 이전 실험 결과의 불확실성으로 인해 IPTG의 영향을 명확히 알기 어려웠다. 단백질 염색 결과를 통해 약 45 kDa 크기의 단백질이 분리된 것을 확인할 수 있었다. 2. Discontinuous Buffer System Discontinuous buffer system은 stackin...2025.01.12
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