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새로운 박테리아 종 동정을 위한 DNA 추출2025.05.081. DNA 추출 과정 본 실험에서는 미지 균주의 DNA를 추출하는 과정을 수행하였다. 균주를 PBS에 현탁하고 원심분리하여 세척한 뒤, lysozyme과 SDS를 처리하여 세포를 용균시켰다. 이후 PCI, chloroform을 이용하여 단백질과 불순물을 제거하고 에탄올 침전을 통해 DNA를 회수하였다. 최종적으로 0.1x SSC 완충액에 녹여 DNA 농도를 측정하였다. 그러나 260/280, 260/230 비율이 이상적인 수준에 미치지 못하여 순수한 DNA 추출에는 어려움이 있었던 것으로 나타났다. 2. DNA 추출 시약의 역할 ...2025.05.08
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세포생리학실험_cell culture, Genomic DNA Isolation_genomic DNA 추출, total RNA 추출, 전기영동2025.01.131. 세포 배양 HEK 293T 세포를 DMEM 배지와 FBS를 사용하여 배양하였다. 세포는 처음에는 동글동글한 모양이었지만 점차 바닥에 붙어 자라나면서 별모양의 형태를 띠었다. 배지의 색이 점점 노란색으로 변하면서 세포가 죽기 시작하였다. 이를 통해 세포가 일정 횟수의 분열을 한 후 노화되는 과정을 관찰할 수 있었다. 2. Genomic DNA 추출 HEK293T 세포에서 genomic DNA를 추출하였다. 세포를 용해시킨 후 단백질과 RNA를 제거하는 과정을 거쳐 순수한 DNA를 분리하였다. 전기영동 결과 DNA 밴드가 마커보다...2025.01.13
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RT-PCR 실험 및 결과 분석2025.05.101. RT-PCR RT-PCR은 RNA를 추출하고 cDNA를 합성하여 PCR로 증폭하는 기술입니다. 이 실험에서는 Labozol을 이용한 RNA 추출, cDNA 합성, GAPDH와 Twist1 유전자의 RT-PCR 증폭을 진행했습니다. RNA 추출 과정에서 chloroform으로 수용성층과 지용성층을 분리하고, isopropanol로 RNA를 침전시켰습니다. 이후 ethanol로 세척하고 DEPC 처리된 물에 재용해하여 RNA 농도와 순도를 확인했습니다. RT-PCR 결과 GAPDH는 일정한 발현을 보였고, Twist1은 chemi...2025.05.10
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추위 노출에 따른 백색지방의 베이지화와 갈색지방 활성화 연구2025.11.181. qPCR을 이용한 유전자 발현 측정 qPCR(실시간 정량적 중합효소연쇄반응)은 RNA를 역전사효소로 cDNA로 변환한 후 실시간으로 증폭하는 기법입니다. 본 실험에서는 추위 노출 마우스와 일반 환경 마우스의 지방조직에서 Ucp1, Dio2, Tbp 유전자의 mRNA 발현량을 비교 측정했습니다. RT-PCR 단계에서 total RNA와 oligo dT, dNTP를 반응시킨 후 역전사효소, DTT와 혼합하여 cDNA를 생성하고, 이를 qPCR로 40 사이클 증폭하여 유전자 발현 수준을 정량화했습니다. 2. 백색지방의 베이지화와 갈...2025.11.18
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식물의 DNA추출 - 통합과학 보고서2025.01.121. 식물 DNA 추출 이 보고서는 식물(바나나)에서 DNA를 추출하는 실험 과정과 결과를 설명합니다. 주방세제, 소금, 에탄올 등의 시약을 사용하여 세포막과 핵막을 파괴하고 DNA를 분리하는 방법을 다룹니다. 또한 DNA의 구조와 특성, 유전 정보 활용 등 관련 내용도 학습한 것으로 나타납니다. 2. 세포막 파괴와 DNA 안정화 주방세제는 계면활성제로 세포막의 인지질을 와해시키고, 소금은 DNA의 인산기와 결합하여 안정화시키고 뭉치게 하는 역할을 합니다. 에탄올은 DNA가 에탄올에 녹지 않는 성질을 이용하여 DNA를 침전시키는 데...2025.01.12
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HEK293T 세포 계대배양 및 핵산 추출 실험2025.11.171. HEK293T 세포 계대배양 HEK293T 세포는 SV40 T 항원을 발현하는 형질전환 세포로, 높은 단백질 발현을 유도한다. 계대배양은 trypsin-EDTA를 이용하여 세포를 배양용기에서 분리하고, centrifuge로 세포를 수집한 후 새로운 배지에 옮기는 과정이다. 세포는 부착단백질과 결합할 때 길게 늘어난 형태를 보이다가, trypsin 처리 후 구형으로 변한다. 8일간의 배양 관찰 결과 시간이 지날수록 배지에 세포가 증식하여 빈 공간이 감소하는 것을 확인할 수 있다. 2. Genomic DNA 추출 Genomic D...2025.11.17
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브로콜리 DNA 추출 실험 보고서2025.11.181. DNA 추출 원리 및 방법 브로콜리 조직을 막자사발로 분쇄하여 세포벽을 파괴한 후, 계면활성제를 이용해 세포막과 핵막을 용해시킨다. 소금은 Na+ 이온을 제공하여 음전하를 띤 DNA 분자 간의 반발력을 감소시키고, 에탄올의 탈수작용으로 DNA를 응축시켜 흰색 침전물 형태로 추출한다. 이 과정을 통해 식물 세포 내 DNA와 단백질을 분리할 수 있다. 2. 계면활성제의 역할 계면활성제는 친수성과 소수성 부분을 가진 양성분자로, 세포막의 인지질 이중층 구조와 유사한 특성을 가진다. 계면활성제가 세포막과 핵막의 인지질과 결합하면 막 ...2025.11.18
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RNA 분리 및 cDNA 합성, 실시간 PCR을 이용한 개화시기 측정2025.11.121. RNA 분리 (RNA Isolation) 생명과학 실험에서 세포나 조직으로부터 RNA를 추출하는 기본적인 분자생물학 기법입니다. 이 과정은 세포를 용해시키고 단백질과 DNA를 제거하여 순수한 RNA를 얻는 것을 목표로 합니다. 추출된 RNA는 이후 역전사 반응이나 유전자 발현 분석 등 다양한 실험의 기초 재료로 사용됩니다. 2. cDNA 합성 (cDNA Construction) mRNA를 주형으로 하여 역전사효소(reverse transcriptase)를 이용해 상보적 DNA(complementary DNA)를 합성하는 과정입...2025.11.12
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[생물공정실험] 3주차 Gene expression analysis by RT-PCR 예비보고서2025.04.261. cDNA 정의 및 합성 방법 cDNA(complementary DNA)는 RNA를 주형으로 역전사효소와 DNA 중합효소에 의해 합성된 DNA입니다. 역전사효소를 이용한 cDNA 합성에서는 RNA와 annealing 위치에 따라 3종류의 primer를 사용할 수 있습니다. (1) 역전사 효소 (reverse transcriptase; RTase), (2) RT반응에 사용하는 primer (oligo dT primer, random primer, gene-specific primer). 2. Downstream applicatio...2025.04.26
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[만점보고서]Plasmid DNA 추출과 DNA 정량 실험보고서2025.01.171. Plasmid DNA 추출 Plasmid DNA는 세균의 세포 내에서 염색체와 별개로 존재하는 자가복제 DNA이다. Plasmid DNA 추출을 위해 Alkaline Lysis 법을 사용하여 세포를 용해시키고 plasmid DNA를 염색체 DNA와 분리한다. 이 과정에서 다양한 buffer를 사용하여 pH 변화를 조절하고 불순물을 제거한다. 2. DNA 정량 Nanodrop 분광광도계를 이용하여 추출한 plasmid DNA의 농도와 순도를 측정한다. 260nm 흡광도로 DNA 농도를 측정하고, 260nm/280nm 및 260n...2025.01.17
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