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Lowry-Folin법을 이용한 단백질 정량2025.01.231. 단백질 정량 이 실험의 목적은 Lowry-Folin법을 이용하여 수용액에 녹아있는 단백질을 정량하고 흡광도 그래프를 그리는 방법을 익히는 것입니다. 실험 방법에는 BSA 표준곡선 작성, 미지의 단백질 시료 측정, 흡광도 측정 및 분석 등의 단계가 포함되어 있습니다. 2. Lowry-Folin법 Lowry-Folin법은 단백질 정량에 널리 사용되는 방법으로, 구리 이온과 단백질의 반응을 통해 청색 발색 반응이 일어나는 원리를 이용합니다. 이 실험에서는 BSA 표준용액을 이용하여 표준곡선을 작성하고, 미지의 단백질 시료의 농도를 ...2025.01.23
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단백질 정량2025.05.071. Biuret method 단백질의 알칼리성 수용액에 저농도 황산구리용액을 몇 방울 떨어뜨리면 청자~적자 색을 띠는 단백질 발색반응이 일어난다. 발색은 구리(II)이온과 착체가 형성되어 이루어진다. 트리펩티드 이상의 펩티드도 같은 반응을 보이고, 발색률은 펩티드에 따른 차이가 거의 없다. 조작이 간단하고 다수의 시료를 단시간에서 측정할 수 있어 많이 사용하지만, 감도가 낮다. 2. Ultraviolet Absorption Method 단백질의 tryptophan과 tyrosin잔기가 280 nm에서 강하게 흡광하는 성질을 이용하...2025.05.07
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세포 용해를 통한 단백질 추출2025.01.021. 세포 용해 방법 세포 용해(또는 세포 파괴)에 사용되는 다양한 물리적, 화학적 방법을 살펴보고, RIPA 용해 완충액을 사용하여 세포를 파괴하고 세포 단백질을 얻을 수 있다. RIPA 용해 완충액은 세포막, 핵막, 단백질 결합을 모두 분해할 수 있는 강한 계면활성제를 포함하고 있어 세포질, 핵 단백질 등 다양한 단백질을 추출할 수 있다. 2. 단백질 추출 과정 배양 중인 MCF-7 세포를 DPBS로 세척하고 세포 긁개로 세포를 모아 원심분리하여 세포 펠릿을 얻었다. 이 세포 펠릿에 RIPA 용해 완충액을 처리하여 세포를 용해하...2025.01.02
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[생화학실험] A+, 세포파쇄 및 단백질 정량법 실험2025.01.031. 세포막 구조 동·식물(진핵세포)의 세포막은 단백질과 인지질로 구성된 이중막 구조이며, 박테리아(원핵세포)의 세포막도 이와 유사한 구조를 가지고 있다. 단백질은 온도, pH 등의 요인에 의해 구조와 기능이 변화할 수 있다. 2. 세포 파쇄 방법 세포막을 파쇄하여 세포 내 단백질 및 대사체를 안정적으로 추출하는 다양한 방법이 있다. 초음파 파쇄, 칼날 분쇄, 막자와 막자사발 분쇄, 효소 파쇄, 삼투압 파쇄, 알칼리 처리, 압착법 등이 있으며 각각의 원리와 특징이 다르다. 3. 단백질 추출 및 정량 단백질은 온도, pH 등의 요인에...2025.01.03
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Lowry-Folin법을 이용한 단백질 정량 (생화학 실험)2025.01.161. 단백질 정량 실험 목적은 Lowry 방법으로 수용액에 녹아 있는 단백질의 양을 정량하는 것입니다. 이를 위해 표준 용액을 이용한 표준 곡선의 작성과 비색정량법을 습득합니다. Lowry 단백질 분석법은 강알칼리 조건에서 구리 이온과 펩타이드 결합의 반응, 그리고 Folin-Ciocalteu 시약과의 반응을 통해 단백질을 정량합니다. 이 방법은 트립토판, 시스테인, 티로신 등의 아미노산과 반응하여 발색되는 원리를 이용합니다. 2. 분광광도법 분광광도법은 물질에 의한 빛의 흡수 현상을 이용하여 화학물질의 양을 정량하는 방법입니다. ...2025.01.16
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Bradford법을 이용한 단백질의 정량 분석2025.01.151. 단백질 정량 분석 실험 목적은 Bradford법을 이용하여 단백질 정량을 하고 Standard curve를 그리는 것입니다. Bradford법은 산성용액에서 Coomassie brilliant blue 염료가 단백질과 결합하여 최대 흡광도가 595 ㎚로 이동하는 원리를 이용합니다. 따라서 595 ㎚에서의 흡광도가 단백질 농도와 비례합니다. 이 방법은 빠르고 비단백질성분들에 의한 방해도 거의 없어 실험실에서 가장 자주 사용하는 단백질 정량법입니다. 2. 단백질 정량의 중요성 단백질 정량은 생화학 실험에서 기본이 되는 과정입니다....2025.01.15
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Cell harvest and protein assay2025.01.231. Cell harvest 세포 배양 시 adherent cell과 suspension cell로 구분할 수 있으며, adherent cell을 harvest하는 방법에는 화학적 방법(trypsin, accutase 사용)과 물리적 방법(scraper 사용)이 있다. 이번 실험에서는 물리적 방법인 scraper를 사용하여 adherent cell을 harvest하였다. 2. Protein extraction 세포 내 단백질을 추출하기 위해 lysis buffer와 phosphatase/protease inhibitor를 사용하여 ...2025.01.23
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BCA assay 정량2025.01.241. BCA assay BCA assay는 단백질 정량 방법 중 하나로, 구리 이온이 단백질과 반응하여 발색하는 원리를 이용합니다. A 용액과 B 용액을 50:1 비율로 섞어 사용하며, 표준 단백질 농도를 0, 0.125, 0.25, 0.5, 1, 2 ug/ml로 준비하여 흡광도를 측정합니다. 이를 통해 샘플의 단백질 농도를 계산할 수 있습니다. 샘플 버퍼, 단백질 양, 용해 버퍼의 양 등을 고려하여 western blotting 실험에 사용할 수 있습니다. 1. BCA assay The BCA (Bicinchoninic Acid)...2025.01.24
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단백질의 정량실험 Lowry method2025.01.201. 단백질 정량 단백질 정량은 시료 내에 포함된 단백질의 양 또는 농도를 구하는 과정이다. 단백질을 가수분해하면 peptide bond가 끊어지면서 아미노산이 유리된다. 단백질의 본질, 시료에 있는 다른 성분들의 특성, 정량분석의 신속도 및 정밀도 등에 따라 적당한 방법을 선택해야 한다. Lowry 법은 Biuret 반응과 Folin-Ciocalteu 반응을 이용하여 단백질을 정량하는 방법으로, 감도가 비교적 넓고 오랫동안 광범위하게 이용되고 있다. 2. Lowry 법 Lowry 법은 알칼리성 용액에서 단백질의 펩티드 결합과 구리...2025.01.20
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Bradford법을 이용한 조단백질 정량시험2025.01.121. 단백질 정량 분석법 Bradford법은 Coomassie Brillant Blue G-250(CBBG)이 단백질과 결합하여 파란색으로 변하는 것을 이용하여 단백질의 농도를 측정하는 방법이다. 이 방법은 신속하고 경제적이며 재현성이 높고 민감도가 매우 높다는 장점이 있지만, 비선형 표준곡선, 계면활성제의 영향, 단백질 종류에 따른 응답 차이 등의 단점도 있다. 2. 우유의 단백질 함량 실험 결과, 우유의 단백질 농도는 46.5 mg/mL로 측정되었다. 이는 국가표준식품성분표에 나와 있는 우유의 단백질 농도 31.79 mg/mL보...2025.01.12
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