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자외 및 가시분광광도계2025.01.111. 자외 및 가시분광광도계 자외 및 가시 분광광도계는 단백질을 정량할 수 있는 중요한 실험 기법이다. 단백질은 세포보다도 훨씬 작아 육안으로 관찰하기 어려우므로 분광광도법을 이용하여 단백질의 양을 정량할 수 있다. 분광광도법은 효소반응 연구와 약물 효과 평가에 활용될 수 있다. 실험에서는 주로 자외선과 가시광선 영역의 빛을 사용하며, 비어의 법칙에 따라 시료의 농도와 흡광도 간의 관계를 파악할 수 있다. BCA assay는 단백질이 구리 이온을 환원시키는 성질을 이용하여 단백질의 양을 정량하는 방법이다. 1. 자외 및 가시분광광도...2025.01.11
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Lowry-Folin 법을 이용한 단백질 정량2025.01.271. 단백질 정량 단백질 정량은 단백질의 발색반응과 흡광도 측정을 사용한다. 단백질은 농도에 비례하여 발색하기 때문에, 흡광도 측정으로 농도를 분석할 수 있다. Lowry-Folin 법은 Biuret 법에 추가 요소가 포함된 정량법으로, 강알칼리성 상태에서 2가 구리이온과 착염을 형성하여 발색하고 아미노산 중 트립토판, 타이로신, 시스테인이 Folin 시약을 환원시켜 청색으로 발색하는 반응을 이용한다. 2. BSA 표준용액 단백질 정량을 위해서는 정확한 농도를 알고 있는 BSA(bovine serum albumin) 표준용액을 사용...2025.01.27
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[만점 레포트] 연세대학교 생화학실험(1) 5주차 method for protein concentration determination2025.05.041. Protein Concentration Determination 이 프레젠테이션에서는 단백질 농도 측정을 위한 다양한 방법들을 소개하고 있습니다. 저브리 방법, 브래드포드 방법, BCA 방법 등 여러 가지 방법론이 설명되어 있으며, 각 방법의 원리와 장단점, 적용 범위 등이 자세히 다루어지고 있습니다. 또한 실험 절차와 계산 방법도 구체적으로 제시되어 있어 실제 실험에 활용할 수 있는 정보를 제공하고 있습니다. 2. Spectrophotometry 단백질 농도 측정을 위해 다양한 분광광도법이 소개되고 있습니다. UV 분광광도법...2025.05.04
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재결합 단백질의 발현/ Expression of recombinant proteins in E. coli2025.01.121. GST-tagged Proteins glutathione S-transferase (GST), histidine (HIS), 기타 친화성 태그를 이용하여 단백질을 정제하게 되면 기존에 잘 알려진 생화학적 특성을 가진 단백질과 알려지지 않은 생화학적 특성을 가진 재조합 단백질의 N 말단에 결합하여 정제를 도와준다. GST 단백질은 번역 시에 안정적이고 가용성이 높은 단백질로 빠르게 접히기 때문에, GST 태그를 포함하면 태그가 없을 때보다 더 잘 발현하고 용해도를 촉진하는 경우가 많다. 2. BCA assay BCA는 Lowry...2025.01.12
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서강대학교 일반생물학실험1 실험 6. GFP 단백질과 단백질 정량 (Protein Measurements)2025.01.021. 단백질 정량 방법 실험에서는 Lowry assay와 Extinction coefficient assay 두 가지 단백질 정량 방법을 사용하여 EGFP의 질량농도를 측정하였다. Lowry assay는 Biuret reaction과 Folin reaction을 거쳐 750nm에서 흡광도를 측정하고 BSA 표준곡선을 이용하여 EGFP 농도를 계산하였다. Extinction coefficient assay는 EGFP의 몰흡광계수와 Lambert-Beer's Law를 이용하여 488nm에서 EGFP 농도를 직접 계산하였다. 두 방법의 ...2025.01.02
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Lowry-Folin법을 이용한 단백질 정량 (생화학 실험)2025.01.161. 단백질 정량 실험 목적은 Lowry 방법으로 수용액에 녹아 있는 단백질의 양을 정량하는 것입니다. 이를 위해 표준 용액을 이용한 표준 곡선의 작성과 비색정량법을 습득합니다. Lowry 단백질 분석법은 강알칼리 조건에서 구리 이온과 펩타이드 결합의 반응, 그리고 Folin-Ciocalteu 시약과의 반응을 통해 단백질을 정량합니다. 이 방법은 트립토판, 시스테인, 티로신 등의 아미노산과 반응하여 발색되는 원리를 이용합니다. 2. 분광광도법 분광광도법은 물질에 의한 빛의 흡수 현상을 이용하여 화학물질의 양을 정량하는 방법입니다. ...2025.01.16
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Bradford법을 이용한 조단백질 정량시험2025.01.121. 단백질 정량 분석법 Bradford법은 Coomassie Brillant Blue G-250(CBBG)이 단백질과 결합하여 파란색으로 변하는 것을 이용하여 단백질의 농도를 측정하는 방법이다. 이 방법은 신속하고 경제적이며 재현성이 높고 민감도가 매우 높다는 장점이 있지만, 비선형 표준곡선, 계면활성제의 영향, 단백질 종류에 따른 응답 차이 등의 단점도 있다. 2. 우유의 단백질 함량 실험 결과, 우유의 단백질 농도는 46.5 mg/mL로 측정되었다. 이는 국가표준식품성분표에 나와 있는 우유의 단백질 농도 31.79 mg/mL보...2025.01.12
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[생화학실험] A+, 세포파쇄 및 단백질 정량법 실험2025.01.031. 세포막 구조 동·식물(진핵세포)의 세포막은 단백질과 인지질로 구성된 이중막 구조이며, 박테리아(원핵세포)의 세포막도 이와 유사한 구조를 가지고 있다. 단백질은 온도, pH 등의 요인에 의해 구조와 기능이 변화할 수 있다. 2. 세포 파쇄 방법 세포막을 파쇄하여 세포 내 단백질 및 대사체를 안정적으로 추출하는 다양한 방법이 있다. 초음파 파쇄, 칼날 분쇄, 막자와 막자사발 분쇄, 효소 파쇄, 삼투압 파쇄, 알칼리 처리, 압착법 등이 있으며 각각의 원리와 특징이 다르다. 3. 단백질 추출 및 정량 단백질은 온도, pH 등의 요인에...2025.01.03
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생명과학에서의 흡광도 측정 (비어-램버르트 법칙, 단백질, DNA 정량)2025.05.091. 흡광도와 Beer-Lambert's law (비어-램버르트 법칙) 흡광도(absorbance)는 물질이 특정 파장의 복사선을 얼마나 잘 흡수하는지를 나타내는 척도이다. Beer-Lambert 법칙은 흡광도와 시료의 몰농도, 빛이 물질을 통과하는 길이의 관계를 설명한다. 이에 따르면 흡광도는 빛이 물질을 통과하는 길이와 시료의 몰농도에 비례한다. 2. 분광광도법 분광광도법은 물질에 빛을 쬐어주어 물질의 에너지 상태를 변화시키고, 이를 통해 물질의 정성 및 정량 분석을 수행하는 방법이다. 자외선-가시광선 분광광도계를 이용하여 20...2025.05.09
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일반생물학실험 결과레포트 [실험9] 핵산과 단백질 정량2025.05.131. 핵산 정량 실험을 통해 추출한 plasmid DNA의 농도를 spectrophotometer로 측정하였다. 측정 결과 DNA 농도는 52.00ug/ml로 나타났다. DNA의 순도를 확인하기 위해 A260/A280과 A260/A230 비율을 계산하였다. A260/A280 비율은 2.080으로 순수한 DNA 범위인 1.8-2.0을 벗어나 있어 DNA가 손상되었거나 오염되었음을 알 수 있다. A260/A230 비율은 0.881로 순수한 DNA 범위인 2.0-2.2를 크게 벗어나 있어 EDTA, 탄수화물, 유기용매 등의 오염이 있는 ...2025.05.13
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