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세균의 형질전환 / bacterial transformation2025.01.121. 유전자 재조합 유전자 재조합은 서로 다른 genome에서 얻은 유전자를 한 세포로 몰아서 돌연변이 없이 새로운 유전형질을 가진 cell을 만드는 과정이다. 유전자 재조합 방법에는 transformation, transduction, conjugation이 있다. Transformation, 즉 형질전환은 세포에 외부 유전자를 인공적으로 도입시켜 숙주세포에 넣어서 세포가 원래의 특성이 아닌 다른 유전형질을 갖도록 하는 것이다. 2. 박테리아의 DNA 흡수 이유 박테리아가 외부 DNA를 흡수하는 이유는 유성생식을 하는 유기체와 다...2025.01.12
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Trypsin EDTA와 Cell Transfection 기술2025.11.171. Trypsin EDTA Trypsin EDTA는 세포 배양 실험에서 필수적인 시약이다. Trypsin은 단백질 분해효소로서 collagen 등의 섬유성 및 당단백질을 분해하고, EDTA는 금속 이온을 킬레이트하여 세포의 접착을 제거한다. 이를 통해 플라스크 등의 배양기 표면에 부착된 세포를 효과적으로 떼어낼 수 있으며, 세포 수확 및 배양에 필수적이다. 또한 세포가 과도하게 밀집되는 것을 방지하고 단일 상태로 유지하여 실험의 정확성과 신뢰성을 높인다. 2. Cell Transfection - 화학적 방법 Cell Transfe...2025.11.17
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반응능 세포(Competent Cell) 제조 실험2025.11.171. 유전자 재조합 기술 특정 유전자가 클로닝된 재조합 플라스미드 DNA를 세포 내에 도입하여 특정 유전자를 다량 확보하거나 발현시켜 원래의 생명체가 만들지 않는 특정 단백질을 생산하는 기법입니다. 표적 DNA를 공여 세포로부터 분리한 후 제한효소로 절단하고, 벡터 DNA와 연결하여 재조합 DNA를 만든 후 숙주세포에 도입하여 형질전환시키는 과정으로 진행됩니다. 2. 반응능 세포(Competent Cell) 유전자 도입에 사용되는 숙주세포로, 외부의 DNA를 받아들일 수 있도록 인위적으로 만들어진 세포입니다. 대장균이 가장 널리 사...2025.11.17
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초원심분리를 이용한 플라스미드 DNA 추출 및 정제2025.12.131. 플라스미드(Plasmid) 플라스미드는 세균 세포의 염색체와 별도로 스스로 복제할 수 있는 DNA 분자이다. 다양한 크기로 존재하며, 형태에 따라 open-circular, relaxed circular, linear, supercoiled(closed-circular) 형태로 분류된다. Open-circular는 원형이지만 한 가닥에 틈이 있고, supercoiled는 DNA 가닥이 꼬여 가장 뭉친 상태이다. 박테리아 세포 내에 존재하는 intact한 플라스미드 DNA 구조는 supercoiled 형태이며, 이는 전기영동에서...2025.12.13
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유전학실험 Gene insertion & deletion2025.01.181. PCR (Polymerase Chain Reaction) PCR은 DNA를 빠르게 증폭시키는 방법으로, Denaturation, Annealing, Elongation의 3단계로 구성된다. Denaturation에서 DNA는 95℃의 고온에 의해 single strand가 되며, Annealing에서 primer가 결합한다. Elongation에서는 약 75℃에서 DNA polymerase의 작용에 의해 DNA의 길이 신장이 일어난다. PCR의 결과값에 영향을 미치는 요인에는 각 단계의 온도, cycle 횟수, buffer s...2025.01.18
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Genome editing / knockout 벡터 확립 및 도입2025.05.031. Genome Editing Genome Editing은 생명체의 특정 염기서열을 교정하거나 편집하는 기술을 의미한다. 이러한 Genome editing 기술에는 과거부터 이용되었던 Zinc finger nucleases나 TALEN을 이용하는 방법이 있었으나 현재는 높은 정확도와 효율성을 갖추고, 비교적 쉽게 디자인할 수 있는 기술인 CRISPR을 주된 tool로써 사용하고 있다. CRISPR/Cas9 기술은 효소가 절단하는 부분의 염기서열을 guide RNA(gRNA)로서 인위적으로 제공해주어 원하는 부분의 DNA를 절단하도...2025.05.03
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RNA 준비 및 cDNA 합성: 형질도입 방법론2025.11.141. 형질도입(Transfection) 형질도입은 바이러스의 핵산이나 플라스미드 벡터를 정제하여 진핵세포 내에 도입하는 과정이다. 원핵세포에 도입될 경우는 형질전환(transformation)이라 한다. 세포막의 인지질 이중층은 인산기로 인해 음전하를 띠고 있으며, 핵산도 음전하를 가지고 있어 자발적 도입이 어렵다. 따라서 화학적, 물리적, 생물학적 방법을 이용하여 세포막을 통과시킨다. 2. 화학적 형질도입 방법(Reagent-based Method) 화학적 방법으로는 양이온성 지질(cationic lipids), 인산칼슘(calc...2025.11.14
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박테리아 형질전환(Transformation) 실험2025.11.161. 형질전환(Transformation) 형질전환은 plasmid DNA를 E.coli에 도입하는 과정입니다. 42℃ heat shock을 통해 세포막의 유동성을 증가시켜 DNA가 통과할 수 있는 adhesion zone을 형성합니다. Heat shock 조건에서 세포 투과성이 증가되며, 이는 작은 DNA 분자가 세포 내로 진입할 수 있게 합니다. Electroporation은 전기장을 사용하는 대안적 방법입니다. 2. 회복 기간(Recovery Period) 회복 기간은 형질전환된 세포의 생존력과 클로닝 효율을 높입니다. 이 기...2025.11.16
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[A+ 리포트] Ligation & Transformation (분자생물학실험)2025.04.251. Ligation 실험에서는 Vector와 PCR 산물을 Ligation하는 과정을 수행하였습니다. Ligation 시 주의사항으로는 T4 Ligase를 ice에 보관하며 가장 마지막에 첨가하고, 강한 충격을 피하는 것 등이 있습니다. 2. Transformation Transformation 과정에서는 Competent cell(E.coli)에 Ligation 산물을 처리하고 Heat-shock을 주었습니다. Competent cell은 온도에 매우 민감하므로 실험 중 ice 상태를 유지하는 것이 중요합니다. 실험 결과 일부 ...2025.04.25
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벡터 플라스미드를 이용한 유전자 재조합 기술2025.12.131. 유전자 재조합(Gene Recombination) 유전자 재조합은 두 가지 의미를 가진다. 첫째, 진핵생물의 생식세포에서 일어나는 감수분열 과정에서 상동염색체의 교차로 인해 발생하는 자연적 현상이다. 둘째, 분자생물학 이론을 기반으로 제한효소와 연결효소를 사용하여 특정 DNA 조각을 다른 생물의 유전자에 인위적으로 삽입하는 기술이다. 이를 통해 원하는 형질을 쉽게 얻을 수 있으며, 현대 생명공학의 기본이 된다. 2. 플라스미드(Plasmid) 플라스미드는 박테리아와 일부 진핵생물에서 발견되는 환형 DNA로, 염색체와 분리되어 ...2025.12.13
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