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SA-β-gal staining을 이용한 세포노화 표지 실험2025.11.171. 세포노화(Cellular Senescence) 세포노화는 세포가 더 이상 분열하지 못하고 영구적으로 세포 주기가 정지하는 현상이다. 1961년 Hayflick에 의해 인간 섬유아세포 배양 시 일정 시간 후 세포 증식이 감소하는 현상이 발견되었으며, 이를 Hayflick limit이라 한다. 텔로미어 마모로 인한 복제노화와 DNA 손상 축적이 주요 원인이며, 노화세포는 세포 크기 증가, 리소좀 단백질 증가, β-galactosidase 활성 증가 등의 특징을 보인다. 2. SA-β-galactosidase 활성과 X-gal 염색...2025.11.17
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DNA 형질전환 실험 결과 및 분석2025.11.141. 형질전환(Transformation) 형질전환은 원래 세포가 가지고 있던 것과 다른 종류의 유전자가 있는 DNA 사슬 조각 또는 플라스미드가 세포들 사이에 침투되어 원래 세포에 존재하던 DNA와 결합하여 세포의 유전형질이 변화되는 분자생물학적 현상이다. 본 실험에서는 재조합된 DNA를 competent cell에 삽입하여 형질전환을 수행하고, ampicillin과 X-gal이 들어 있는 LB plate에서 배양하여 colony를 형성시켰다. 2. 재조합 DNA 선별 방법 클로닝된 DNA 조각이 벡터에 성공적으로 삽입되었는지 확...2025.11.14
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[서강대학교 현대생물학실험2] (2차 풀레포트) TA cloning & transformation, mini-prep, Enzyme cut, electrophoresis2025.01.221. TA cloning TA cloning을 통해 insert를 삽입한 vector는 transformation을 이용해 세포에 주입하여 lacZ selection으로 insert 삽입 여부를 확인할 수 있다. lacZ operon이 작동하면 β-1, 4-linkage를 분해 시킬 수 있는 β-galactosidase가 생성된다. X-gal(5-bromo-4-chloro-3-indolyl-D-galactopyranoside)은 β-1, 4 linkage를 가지고 있으며 이 linkage가 분해되면 파란색을 띠게 된다. 2. Tra...2025.01.22
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TA 클로닝과 형질전환을 이용한 재조합 플라스미드 제작2025.12.121. TA 클로닝 TA 클로닝은 PCR 산물의 3' 말단에 부가된 deoxyadenosine(dA)과 T-vector의 3' 말단의 deoxythymidine(dT)이 상보적으로 수소결합하는 원리를 이용한 클로닝 방법이다. Topoisomerase가 CCTT 염기서열을 인지하여 nick이나 결손 부위를 연결하고, PCR 산물과 vector가 만나면 topoisomerase가 양쪽의 PO3와 OH기를 연결하여 covalent bond energy를 통해 짧은 시간에 ligation이 진행된다. 추가적인 ligase 없이도 효율적으로 ...2025.12.12
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유전 발생 생물학 실험 레포트 Cellular Senescence SA-B-gal staining2025.01.131. 세포 노화(cellular Senescence) 세포 노화(cellular senescence)는 DNA손상, 텔로미어 기능 장애, 종양 유전자 활성화 및 세포기관 스트레스를 포함한 다양한 유발 요인에 대한 반응으로 발생한다. 세포 노화는 암세포로 발전될 수 있는 세포의 세포 주기(cell cycle)을 정지시켜 손상된 세포의 증식을 막는다. 또한 cellular senescence cell은 세포질로 다양한 protein을 분비하게 되는데 이를 SASP(senescence-associated secretion phenoty...2025.01.13
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형질전환과 블루-화이트 스크리닝 실험2025.11.171. 형질전환(Transformation) 형질전환은 외부의 DNA 또는 플라스미드가 세포에 도입되어 새로운 유전형질을 획득하는 현상입니다. 자연계에서는 세균 성장 곡선의 정체기에 주로 발생하지만, 실험실에서는 화학적 또는 물리적 처리를 통해 수용능 있는 세포(competent cell)를 만들어 효율적으로 형질전환을 수행합니다. 본 실험에서는 CaCl2 처리를 통해 TOP10 E.coli competent cell을 준비하고, heat shock 방식으로 플라스미드 DNA를 세포 내로 도입했습니다. 2. 블루-화이트 스크리닝(Bl...2025.11.17
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DNA 전기영동과 플라스미드 정제 실험2025.12.191. Agarose Gel Electrophoresis (아가로스 겔 전기영동) DNA 분자는 음전하를 띠는 인산기로 인해 중성 pH에서 양극으로 이동하며, 크기가 작을수록 빠르게 이동한다. Agarose는 한천에 함유된 다당류로 200 bp~50 kb 범위의 DNA fragment를 분리할 수 있다. Agarose 농도가 높을수록 DNA 이동 속도가 느려지지만 작은 크기의 DNA를 분리할 수 있으며, pH, DNA 구조, 온도 등이 이동 속도에 영향을 준다. Ethidium bromide(EtBr)는 DNA 사이에 삽입되어 UV ...2025.12.19
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아동간호학 미만성구간혈관각화종(파브리병) 문헌고찰2025.01.291. 파브리병 파브리병은 리소좀에서 특정 당지질 대사에 필요한 효소가 결핍되어 발생하는 리소좀 저장 질환이다. X염색체 열성 유전으로, 발생 빈도는 약 12만 명당 1명이며 인종이나 민족에 관계없이 발생한다. 이 병은 1898년 독일의 존 파브리와 영국의 윌리엄스 앤더슨에 의해 처음 보고되었고, 앤더슨-파브리병이라고도 불린다. 파브리병은 α-갈락토시다아제(α-GAL) 효소의 결여로 인해 글라보오실세라마이드(GL-3) 같은 당지질이 축적되어 조직과 기관의 기능을 손상시킨다. 2. 병태생리 및 원인 파브리병은 비정상적인 DNA 서열에 ...2025.01.29
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Yamanaka 박사의 iPS 세포 유도 기술과 의학적 우수성2025.12.191. iPS 세포 유도 기술 Yamanaka 박사는 2006년 마우스 배아 섬유아세포(MEF)와 성인 섬유아세포를 전사인자(Oct3/4, Sox2, Kif4, c-Myc) 4가지를 이용하여 다능성 상태에서 전능성 상태로 재프로그래밍했습니다. 레트로바이러스를 이용해 전사인자 cDNA를 세포 게놈에 주입하고, Fbx-15 유전자 위치에 Bgeo 카세트를 삽입하여 성공적인 유전자 삽입을 확인했습니다. X-gal과 G418 배지에서 푸른색 콜로니 형성으로 성공적인 유도를 검증했습니다. 2. iPS 세포의 줄기세포 특성 검증 계대배양을 통한...2025.12.19
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효소 활성에 영향을 미치는 요인 분석2025.12.131. 효소의 기질농도에 따른 활성 일정한 농도의 효소가 있을 때 기질의 농도가 높을수록 효소-기질 복합체 형성 가능성이 높아져 반응속도가 증가한다. 실험에서 ONPG 농도 100µM, 250µM, 500µM에서 반응시간이 길수록 흡광도가 높게 측정되었다. 그러나 기질 농도가 계속 높아지면 모든 효소가 기질과 결합하는 포화상태에 도달하여 반응속도 증가에 한계가 생긴다. 2. 효소의 온도에 따른 활성 β-galactosidase는 37℃에서 최대 활성(흡광도 0.192)을 나타낸다. 온도가 증가함에 따라 효소 활성도 증가하다가 40℃를...2025.12.13
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